猪链球菌2型检测技术概述

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1、猪链球菌2型检测技术概述一69一@中国动物检疫2o09年第26卷第10期猪链球菌2型检测技术概述赵云玲,王君玮,王华,王志亮(中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心,山东青岛266114)摘要:猪链球菌(streptococcussuis)病是由多种不同群的链球菌引起的一种人畜共患的急性,热性传染病,世界各地多个国家均有猪感染发病且致人死亡的报道.本文结合我们对猪链球菌2型的检测技术研究成果,从微生物学检测,血清学检测,分子生物学检测等方面进行了综述.关键词:猪链球菌2型;检测技术;分子生物

2、学中图分类号:s855.99文献标识码:B文章编号:1o05—944x(2009)10一O069—02猪链球菌(Streptococcussuis)病是由多种不同群的链球菌引起的一种人畜共患的急性,热性传染病,可导致猪败血症肺炎,脑膜炎,关节炎及心内膜炎,世界各地均有发生_1].近年来在欧洲,美洲和亚洲多个国家均有猪感染发病且致人死亡的报道.在我国,进入90年代以后,猪链球菌2型(Streptococcussuisserotype2)在我国许多地方发病率不断上升.l990年首次在我国广东发现猪链球菌2型

3、,1998年江苏海安,如皋,泰兴,通州等地暴发猪链球菌2型感染,猪群病死率高达39.7%,造成巨大经济损失,在流行地区亦有人感染并导致死亡的病例[2',1999年,江苏靖安义出现8例人一猪链球菌感染引起的脑膜炎病例,经检验均为猪链球菌2型感染_3].2O05年6月四川资阳等地再次暴发猪链球菌2型感染,导致人感染2O0多例,近40人死亡[4_,造成重大经济损失,并在一定程度上引起社会恐慌.因此,及时,准确的诊断的猪链球菌,为治疗提供必要的依据就显得尤为重要.本文对猪链球菌2型的检测技术从微生物学检测,血清

4、学检测,分子生物学检测等方面进行综述.1微生物学检测从患病动物典型病变脏器中分离到细菌,并根据细菌形态,培养特性和生化特性等可对2型猪链球菌进行初步鉴定.猪链球菌是革兰氏阳性,兼性厌氧菌,多呈球形或短链状;液体培养物中链较长,一般由8—15个球菌排成链状,无鞭毛,无芽孢,不运动,无资助项目:青岛市科技发展计划项目(O5—2一JC一78)通讯作者:王志亮两极着色现象.在普通营养琼脂平板上生长贫瘠;在血琼脂平板上生长良好,长出灰白色,圆形,透明,闪光,中央隆起,表面光滑露珠状小菌落;在麦康凯琼脂平板上不生长

5、;在血清肉汤中生长良好.该菌在Todd—Henitt及Mc—conkey培养基中生长良好,在富含淀粉的培养基中能产生淀粉酶,VP反应阴性.6.5%NaC1抑制其生长,不能还原0.1%的美蓝,能还原石蕊乳并产生酸,能发酵菊粉和棉子糖,七叶苷水解阳性,马尿酸盐,pyrrolidony—lamidase和甘露糖阴性.融血性不很典型,依菌株及培养而变化,一般在含羊血培养基上呈现a融血,在含马血清的培养基上呈p融血.API20strep生化鉴定系统只能鉴定到种一猪链球菌.链球菌2型生化试验结果差异较大,仅以形态,

6、培养和生化反应等表型特征难以将细菌准确定型,需要借助其他检验方法才能准确定型.2血清学检测方法根据猪链球菌2型菌株表面多糖结构可用血清学方法鉴定.血清学鉴定方法比较多,常用的有玻片凝集,琼脂扩散试验,SPA协同凝集试验,乳胶凝集试验和毛细管沉淀试验.黄毓茂等(1995)吲用玻片凝集,琼脂扩散及毛细管沉淀三项试验鉴定l990广东分离猪链球菌l株,首次证实中国猪链球菌2型的存在.血清学试验需细菌的纯培养物和各种特异血清.细菌悬液制备:分离菌血清肉汤培养物经缓冲肉汤培养8h,3o00r/min离心10min,

7、用PBs洗涤2次,最后用pH7.2的0.01mol/L的PBS稀释成l×l02×1OCFu/mIJ.针对猪链球菌2型的鉴定,要先用兰氏分型乳胶凝集链球菌试剂盒进行分群,再用猪链球菌特异血清进行分型.这几种方法需要有猪链球菌型特异性血清,一般实验室难以获得而且价格昂贵,其推广受到限制.荷兰学者哺根据猪链球菌2型的两种毒力因子MRP和EF用相应的单克隆抗体建立了双抗体夹心ELIsA(2DAs—ELIsA),可以准确区分猪链球菌2型的3种表型;陈兴扶等以2.5%NaCl浸提猪链球菌荚膜多糖抗原,选用2%明胶作

8、封闭液,4%PEG—PBs为血清稀释液,用EIJISA法检测了猪链球菌血清抗体,特异性强,比琼脂扩散敏感25—250倍.欧瑜等[田用提纯的融菌酶释放蛋白(MRP)和胞外因子(EF)制备其抗体,以细菌培养上清为抗原,建立了2型猪链球菌的Dot—ELISA和间接ELISA的检测方法,可以区分猪链球菌2型菌株致病性的有无.3分子生物学检测方法临床上由于猪链球菌2型感染引起的猪链球菌病往往发病快,传统诊断方法周期较长,很可能会延误治疗时机,使病情得