磁珠法质粒dna小量抽提试剂盒说明书

《磁珠法质粒dna小量抽提试剂盒说明书》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒MagBeadsPlasmidDNAMiniExtractionKit【目录号】PDE-5005、PDE-5010、PDE-5030、PDE-5100【运输条件】2~25℃；【保存条件】组分①、③、④于2~8℃保存；组分⑦于-20℃保存；其它组分室温保存；【试剂盒组成】KitComponent试剂盒组成PDE-5005（50T）PDE-5010（100T）PDE-5030（300T）PDE-5100（100T）①PDE-Buffer1菌体悬浮液12mL22mL65mL220mL②PDE-Buffer2菌体裂解液12mL22mL65

2、mL220mL③PDE-Buffer3质粒复性液20mL40mL110mL400mL④MagneticBeads磁珠悬浮液3mL6mL16mL55mL⑤WashBuffer清洗液30mL60mL160mL520mL⑥EluteBuffer洗脱液10mL20mL30mL60mL⑦RNaseASolutionRNaseA酶溶液30μL60μL165μL600μL【注意事项】1.使用前将RNaseA溶液（组分⑦）全部加入菌体悬浮液（组分①）中，4℃保存备用；2.使用前检查菌体裂解液（组分②）是否出现浑浊，如有请置于37℃水浴中温浴至澄清；3.实验前质粒复性液（组分③）需提前置于4℃冷却充分；4.

3、菌体裂解液（组分②）和质粒复性液（组分③）使用后应请立即盖紧盖子；5.磁珠悬浮液（组分④）严禁冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；6.所有离心步骤均为室温下进行，其中加入质粒复性液（组分③）后低温离心效果更佳；7.RNaseA溶液（组分⑦）长期不使用于-20℃保存，融化后4℃保存，并尽快使用；8.质粒DNA抽提得量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关；9.本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细阅读并按指南建议操作。7磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒【产品简介】本试剂盒可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提。试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。磁珠表面修饰有特殊化学

4、基团，在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力，当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA，从而达到分离纯化质粒DNA的效果。整个操作过程简便、快速。本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质，保证提取所得质粒DNA的纯度，所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。本试剂盒可在EP管中进行手动法操作、在96孔圆孔板中实现手动法高通量操作（单人同时操作1~6块96孔板，可同步实现96~576份样本抽提工作）、或者与各种自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。【试剂盒说明】样本类型样本量核酸得量单样本提取时间6×96孔板提取时间菌液1.0~5.0mL10~

5、20μg<40min<60min【自备仪器、耗材和试剂】手动普通版金属浴、涡旋混合仪、离心机、EP管、EP管用磁力架、80%乙醇。手动高通量版涡旋混合仪、吸水纸、烘箱或电风扇、水浴锅、96孔圆孔板（孔体积2.2mL）、96孔圆孔板专用磁力架、96孔板离心机、48孔尖底板（孔体积4mL）、48孔板用硅胶垫（或PCR板封板膜）、80%乙醇。仪器自动版英芮诚ETP-400核酸提取仪、涡旋混合仪、离心机、EP管、96孔圆孔板、80%乙醇。【手动普通版操作步骤】1.菌体收集将适量菌体(1.0~5.0mL)转移至EP管中，室温、12000rpm离心2min，吸弃上清液。2.菌体悬浮向EP管中加入200

6、μL菌体悬浮液，摇晃将菌体沉淀彻底悬浮。3.菌体裂解向EP管中加入200μL菌体裂解液，上下轻柔颠倒EP管约2min使菌体充分裂解，7磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒裂解液应变为基本澄清。注：如果菌液量较大，可延长裂解时间至约4min，但不宜超过4min，否则质粒难以复性。1.质粒复性向EP管中加入350μL质粒复性液（已4℃冷却充分），上下轻柔颠倒EP管使质粒复性（最佳状态为内容物呈蛋花状）。将EP管于4℃、12000rpm离心10min，将上清液转移到新的EP管中，并做好记录。2.核酸结合向转入上清液的EP管中加入50μL吹打均匀的磁珠悬浮液，涡旋振荡5min，确保磁珠与溶液充分混匀。3

7、.磁性分离将EP管置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全。如EP管内盖有磁珠残夜，保持EP管于磁力架上，整体颠倒两次使磁珠吸附完全，然后彻底吸弃上清液，期间避免接触磁珠。4.清洗1）向EP管中加入500μL清洗液，从磁力架上取下，上下用力摇动3~5次（或使用移液器吹打）使磁珠分散均匀，然后涡旋震荡1min，参考步骤6进行磁性分离。2）使用500μL80%乙醇，参照步骤7(1)操作2次。注：该步骤DNA量过多时可能引起磁珠