高效液相色谱法及超临界流体色谱法

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1、现代分析技术第十章第十章高效液相色谱法及超临界流体色谱法10.1概述10.2高效液相色谱法的基本原理10.3高效液相色谱法的类型10.4高效液相色谱仪10.5超临界流体色谱法10.6实验技术210.1概述HPLChighvelocity,highresolutionandhighsensitivityHigh-PerformanceLiquidChromatographyHigh-PressureLiquidChromatographyHigh-PriceLiquidChromatography34510.2HPLC的基本原理GC的基本理论、基本概念适用于HPLC。液相色谱的vanDeem

2、ter方程6涡流扩散项纵向扩散项传质阻抗项板高H越小，分离效率越高。可以从色谱柱、流动相、及流速等方面综合考虑，提高HPLC的柱效的措施采用颗粒小而均匀的填料，填充均匀；采用表面多孔的填料，减小填料的孔隙深度；流动相采用小分子溶剂，减小粘度(H2O、ACN、MeOH)；适当提高柱温，增大Dm；采用一定的流动相流速u(一般1mL/min)7柱外效应：柱前峰展宽＋柱后峰展宽柱前峰展宽＝进样及进样器到色谱柱连接管引起柱前后展宽＝检测器流通池和连接管引起10.3HPLC的类型I液液分配色谱法LiquidLiquidPartitionChromatography,LLPC固定相与流动相均为液体(互不

3、相溶)；基本原理：组分在固定相和流动相上的不同分配而实现分离；固定相：早期涂渍固定液，容易流失，现较少采用；化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。8（1）寿命长，固定液不易流失，柱稳定性高；（2）传质快，表面均一，无深凹陷，比一般液体固定相传质快；（4）选择性好，可键合不同基团改变其选择性；（5）耐受各种溶剂，有利于梯度洗脱；流动相类别流动相按极性分：极性(乙腈、甲醇、水)；弱极性(氯仿、乙酸乙酯)；非极性(己烷)；9正相色谱法反向色谱法采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。II液固吸附色谱法

4、LiquidSolidAbsorptionChromatography,LSAC10固定相：固体吸附剂（硅胶）基本原理：根据组分在固定相上的吸附作用的不同进行分离；样品分子(X)被流动相带入柱内，与流动相分子(S)在吸附剂的表面发生竞争性的吸附作用.吸附平衡常数K越大，保留值越大。LASC中，流动相：烷烃为底剂的二元或多元溶剂，己烷＋乙酸乙酯；己烷＋氯仿III离子交换色谱法IonExchangeChromatography,IECK越大，离子交换能力越强，固定相对被分析离子的保留越强；分析对象：离子(各种无机阴阳离子)：SO42+、NO3－、Cl－、Na＋、Mg＋等有机酸碱、氨基酸11固定

5、相：离子交换树脂(聚苯乙烯和二乙烯基的交联聚合物，硅胶键合离子交换剂)流动相：含有反离子的水溶液(柠檬酸根离子、CO3－、F－)基本原理：样品中离子与离子交换树脂的交换能力的不同进行分离；1213IV离子对色谱法IonPairChromatography,IPC固定相：C18/C8上涂渍或在流动相中加入与溶质分子电荷相反的离子对试剂流动相：有机溶剂(甲醇/乙腈－水)加入离子对试剂离子对试剂：烷基铵类：(C4H9)4N+OH-、C16H33(CH3)3N+OH-(分析X－)烷基磺酸类：己烷磺酸钠C6H13SO3Na(分析X＋)基本原理：根据形成的离子对化合物在两相间分配不同而分离。14生成的

6、离子对与固定相的亲和力越大，保留越强，出峰越后。分析对象：有机酸、有机碱等Column：IonPacNS1、NG1Eluent：2mMTBAOH,24%48%ACNin10minFlowrate：1.0mL/minDetection：Conductivity(suppressortype)Regenerator：10mNH2SO41.Methanesulfonicacid5.0μg/mL(ppm)2.1-Propanesulfonicacid8.63.1-Butanesulfonicacid8.74.1-Hexanesulfonicacid8.85.1-Heptanesulfonicac

7、id8.96.1-Octanesulfonicacid8.97.1-Decanesulfonicacid9.10Retentiontime(min)12168µS0.0416234578.0反相离子对色谱分离有机酸V离子色谱法IonChromatography,IC固定相：离子交换树脂流动相：电解质溶液（高电导）分离原理：同IEC，离子交换后的洗脱液进入抑制柱后进行电导检测特点：抑制柱将样品离子转变成相应的酸、碱增加电导