eb病毒转化b淋巴母细胞在汉滩病毒ctl表位研究中的应用

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1、EB病毒转化B淋巴母细胞在汉滩病毒CTL表位研究中的应用作者：王美亮,张全华,王九平,李永明,马樱,金伯泉【摘要】　　目的:建立EB病毒转化B淋巴母细胞系（BLCL）,作为抗原提呈细胞(APC)提呈抗原肽,刺激短期培养的特异性T细胞活化并分泌IFNγ,从而应用于T细胞表位鉴定中。方法:用B958细胞培养上清中的EB病毒转化肾综合征出血热（HFRS）患者PBMC,建立HFRS患者的BLCL,以自身BLCL为APC,加载抗原肽后,刺激短期培养的G9L特异的HFRS患者CD8+T细胞系,应用ELISPOT测定CD8+T细胞受到抗原肽刺激后产生IFNγ的能力。结果:加载过抗原肽G9L或V1

2、5R的BLCL可刺激G9L特异的CD8+T细胞活化并产生IFNγ,而与G9L无同源序列的I15P则不能刺激G9L特异的CD8+T细胞活化。结论:BLCL可作为非专职APC有效地将抗原肽提呈给特异性T细胞。【关键词】B淋巴母细胞;EB病毒转化;抗原提呈细胞;CTL表位　　［Abstract］AIM:ToestablishEpsteinBarrvirus(EBV)transformedBlymphoblasticcelllines(BLCL)topresentpeptidesasantigenpresentingcells(APC)and10stimulateshortcultur

3、edTcellssecretingIFNγ,bywhichtheTcellepitopesareidentified.METHODS:PBMCsfrompatientswithhemorrhagicfeverwithrenalsyndrome(HFRS)weretransformedusingEBVfromsupernatantofB958cells.ELISPOTassaywasthenemployedtoevaluatetheIFNγproductionofshortculturedG9LspecificCD8+Tcellsstimulatedwithpeptidepulsed

4、autologousBLCLcells.RESULTS:BLCLpulsedwithG9LorG9LnestedV15RcanstimulateG9LspecificCD8+TcellsproducingIFNγ,butnotBLCLpulsedwithnonhomologousI15P.CONCLUSION:BLCLcanefficientlyandspecificallypresentpeptidestopeptidespecificTcellsasnonprofessionalAPC.　　［Keywords］Blymphoblasticcellline;Epstein

5、Barrvirustransformed;Antigenpresentingcell;CTLepitope　　抗原提呈细胞（APC）是一群能够摄取、加工、处理抗原,并将抗原肽提呈给抗原特异性T细胞的细胞。APC包括树突状细胞、单核巨噬细胞和B细胞等。其中,树突状细胞具有很强的抗原提呈能力,可在体内和体外刺激初始T细胞活化。但由于采集患者的外周血比较困难,而树突状细胞的分离培养则需要不断地采集血液,在实际应用中有局限性。鉴于B细胞受到EB病毒感染后,10具有克隆扩增的特点,可建立永生化的BLCL。BLCL在经过EB病毒的转化后,依然保持了B细胞的分化状态和免疫表型［1］。对其进行HL

6、A基因分型后,即可源源不断地应用于后续的研究中。本研究中建立了肾综合征出血热(HFRS)患者的B淋巴母细胞系,并以此作为APC,提呈抗原肽给自身的CD8+T细胞,应用ELISPOT测定了活化T细胞产生的细胞因子。　　1材料和方法　　1.1材料HFRS患者35例为第四军医大学唐都医院2002/2004住院患者。HTNV特异性IgM抗体均为阳性。IFNγELISPOT试剂盒购自Mabtech公司;BCIP/NBT购自Sigma公司;96孔PVDF滤膜板（MAIPN45）购自Millipore公司;ELISPOT读数仪,购自北京赛智公司;RPMI1640购自Sigma公司;小牛血清（FCS）购自杭

7、州四季青生物工程材料公司;EB病毒高产株B958由本室冻存;FITC羊抗鼠IgG为Sigma产品;PECD19及其同型对照购自BD公司;HLADRmAb为ATCC产品。可刺激1例HFRS患者CD8+T细胞产生IFNγ的9肽G9L（GPATNRDYL）、15肽V15R（VSLLGGPATNRDYLR）和I15P（ITPGRYRTAVCGLYP）（将另文发表）,购自西安联美生物公司,经RP