反相高效液相法测定保妇康栓中莪术醇的含量

《反相高效液相法测定保妇康栓中莪术醇的含量》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、反相高效液相法测定保妇康栓中莪术醇的含量【摘要】目的：采用反相高效液相法测定保妇康栓中莪术醇的含量。方法：流动相为：乙腈-0.2%醋酸(50:50)；检测波长200nm；流速1.0ml/min。线性范围0.5～2.0μg，γ=0.9997，平均回收率96.98%，RSD＝1.23%。结果：样品峰与干扰峰完全分开，峰形对称，且阴性无干扰。本法灵敏、专属性高、重现性好，可作为制剂质量控制方法。【关键词】保妇康栓；莪术醇；反相高效液相法保妇康栓为中国药典中药成方制剂，处方中的莪术油含有榄香烯、莪术醇、莪术二酮等成分，其中莪术醇为较明确的消炎、抗菌、抗癌活性成分[1]。虽然包括2005年版药典在内的

2、多数文献采用气相色谱法进行莪术油的含量测定[2~4]，但气相色谱法重现性较差，应用范围没有液相色谱法广泛，所以我们对制剂中的莪术醇含量测定进行了液相色谱方法的研究，取得理想的效果。1材料与方法1.1仪器与试剂Waters高效液相色谱仪，1525二元泵，Rheodyne7725i进样器，2487双波长UV检测器，Breeze6工作站；市售保妇康栓；莪术醇对照品购自中国药品生物制品鉴定所，供含量测定用，批号100185-200305；乙腈（色谱纯）购自天津四友公司；其他试剂均为化学分析纯。1.2方法1.2．1色谱条件SinoChromODS-AP色谱柱（5μm，4.6mm×150mm，大连依利特

3、）。流动相：乙腈-水(50:50)，检测波长200nm；流速1.0ml/min。1．2.2对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥48h的莪术醇对照品适量，加甲醇制成0.1mg/ml的溶液。1.2．3供试品制备取本品1粒加水适量，置水浴上熔化后冷却，加石油醚(30℃～60℃)30ml，超声处理20min置分液漏斗中。水层放回锥形瓶，醚层置50ml量瓶中，用少量石油醚分次洗涤锥形瓶，洗液经分液漏斗分层后并入量瓶，用石油醚定容。吸取10ml溶液上硅胶柱（直径10mm，4g，105℃6活化0.5h），待石油醚溶液上样完后加石油醚：乙醚（2:1）15ml洗脱，洗脱置浅紫黑色区带移出色谱柱

4、后，用25ml量筒收集洗脱液，前2ml弃去。收集石油醚：乙醚洗脱液13ml，换甲醇洗脱，继续收集洗脱液至黄色区带即将移出色谱柱为止。将量筒中的混合溶液移入25ml锥形瓶，用5ml甲醇分次洗涤量筒，洗液并入锥形瓶。然后将锥形瓶置50℃水浴中挥发干醚层，移入25ml量瓶，加甲醇定容。2结果2．1专属性取缺莪术阴性样品进行测定，与样品和对照品图谱相比，在莪术醇位置无干扰（见图1）。反相高效液相色谱法含量测定过程中，对照品、样品出峰时，从检测器废液出口收集洗脱液至出峰结束。将收集到的洗脱液挥去乙腈，加0.2ml石油醚振摇混合，待分层后吸取石油醚层点于硅胶G薄层板上，用石油醚：乙酸乙酯（9∶1）展开，

5、用1%硫酸香草醛显色。样品洗脱液、对照品洗脱液、对照品在相同位置上均显单一的红色斑点。2．2标准曲线的绘制取0.1000mg/ml对照品溶液，精密稀释出0.0250mg/ml，0.0500mg/ml，0.0625mg/ml，0.0750mg/ml，0.0875mg/ml的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液，进样20μl，按色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，莪术醇的质量为横座标绘制标准曲线，计算其回归方程为：y=3.54x+0.00258，γ=0.9997，表明莪术醇在0.5～2.0μg（浓度×进样量）范围内具有良好的线性关系。2．3稳定性试验取同一供试品，间隔1h进样测定1次，

6、连续7次，平均峰面积＝5489321，RSD=1.23%。由此结果表明样品在6h内稳定。62．4重复精密度试验精密吸取对照品溶液10μl，重复进样5次，测定其峰面积，平均峰面积=5426519，RSD=0.67%。由上述结果可知仪器的精密度符合要求。2．5重现性取同一批供试品，重复测定含量5次，平均含量=4.31mg/g，RSD=1.56%，由此说明方法重现性较好。2．6回收率试验采用加样回收法，精密称取已知含量（4.31mg/g）样品1.75g，定量加入浓度7.5450mg/ml的莪术醇对照品1ml，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。2．7样品测定用本文方法测定3批号的保妇康

7、栓制剂，结果批号020601、020702、020703的样品含量分别4.21、4.52、4.06mg/粒。3讨论莪术醇没有紫外最大吸收，只能利用其末端吸收来测定。紫外吸收是相对的，在不同溶剂中吸收度很不一样。尝试使用甲醇∶水做流动相，莪术醇没有出峰，原因可能是甲醇的紫外截止波长为205nm，水为200nm，背景吸收太大造成。而当用乙腈∶水做流动相，乙腈的紫外截止波长为190nm，结果莪术醇在200nm、20