技术二：macs(磁珠分选)标记策略

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1、技术二：MACS(磁珠分选)标记策略应用MACS技术进行磁性细胞分选最重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记，并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式：直接标记和间接标记。 一、磁性细胞标记方式 1、直接磁性细胞标记（Directmagneticcelllabeling） 直接标记是最快速、最特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。 2、间接磁性细胞标记（Indirectmagneticcelllabeling） 间接磁性细胞标

2、记需要联合使用单克隆或者多克隆抗体和MACS间标微珠。未结合抗体、生物素化抗体或者荧光素标记抗体均可作为一抗标记细胞，再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗，均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用：当没有直标磁珠时；需要用几种抗体的混合物同时分选或去除多种类型的细胞；间接标记有放大作用，因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用；使用自备抗体或者配体的磁珠分选中。　二、MACS分选策略 有两种基本的分选

3、策略阳性分选和去除分选。复合分选策略是将两种基本分选策略相结合或者联合使用多选微珠，从而实现细胞亚群的分选。1、阳性分选策略（Positiveselectionstrategy）阳性分选中，目的细胞被磁性标记后，作为阳性标记组分直接分选出来。分选后的细胞不必去除MACS微珠，可立即用于培养或者后续操作。该方法可以将磁性标记的靶细胞富集10000倍。阳性分选策略优点：纯度高，回收率高，操作迅速、简便。   2、去除分选策略（Depletionstrategy）去除分选是把非目的细胞磁性标记后从细胞混合

4、物中去除的方法，即未磁性标记的细胞为目的细胞。MACS分选柱技术加上强磁性标记可以去除高达4个对数级的细胞。去除分选策略适用范围：去除不需要的细胞；缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞）；不需要抗体和目的细胞结合，即细胞不被激惹（如T细胞、B细胞、NK细胞功能分析）；复合分选的一部分。3、复合分选策略联合使用两种以上分选策略，主要用于细胞亚群的分选或者得到高纯度非常稀有的细胞。（1）去除后再阳性分选（Depletionfollowedbypositiveselection）细胞亚群的分选，可以先

5、磁性标记非目的细胞，去除分选后对阴性组分再行磁性标记和阳性分选。适用范围：在细胞悬液中，非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原，就需要先去除这群非目的细胞；如果要分选非常稀有细胞，先从细胞悬液中去除非目的细胞，在富集细胞的基础上，进行阳性分选，可获得高纯度目的细胞。（2）多重分选策略（MultiSortStrategy）MACS多重分选是一种根据多种表面标志磁性分选细胞的技术。多重分选中，首先用MACS多选微珠标记目的细胞，进行第一参数阳性分选。然后细胞与多选解离试剂共同孵育，后者可以将微珠从抗

6、体上酶性解离下来。接着使用针对另一细胞表面标志的抗体－微珠复合物磁性标记阳性分选细胞。二次标记的细胞可以再次进行阳性分选或者去除分选。