gbt 14643.1-1993 工业循环冷却水中粘液形成菌的测定 平皿计数法

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1、中华人民共和国国家标准工业循环冷却水中粘液形成菌的测定平皿计数法GB/T14643.1一93Industrialcirculatingcoolingwater-Examinationofbacteriaformeddeposits-Standardofplatecount1主题内容与适用范围本标准规定了工业循环冷却水中粘液形成菌的测定方法。本标准适用于工业循环冷却水中悬浮的粘泥中的异养菌的测定。也适用于工业循环冷却水中沉积的粘泥中异养菌的测定，还适用于原水，生活用水及其他水中粘液异养菌的测定。2引用标准GB603化学试

2、剂试验方法所用制剂及制品的制备。GB6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要本法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的粘泥，所得的粘泥用石英砂充分研磨使细胞分散，再利用平皿计数技术在29士1℃培养72b来测定粘泥中的异养菌总数。4试剂和材料本试验测定方法中，除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB6682中三级水规格的水。4.1牛肉膏:生化试剂;4,2蛋白脉:生化试剂;4.3氯化钠(GB1266);4.4琼脂:生物试剂;4.5氢氧化钠(GB629),40g/L溶液;4.6盐酸(GB622)溶液:1+11;4.7乙

3、醇(GB678)溶液:75%(v/v);4.8牛皮纸;4.9医用脱脂棉;4.10医用脱脂纱布;4.11石英砂:210^-150pm.国家技术监督局1993一08一06批准1994一07一01实施GB/T14643.1一935仪器和设备5.125号浮游生物网;5.2量筒:25m1;5.3量筒500ml;5.4转子流最计;55瓷研钵;5，6无菌箱(室)或超净工作台;5.了蒸汽压力灭菌器;5.8生化培荞箱;5.9电热千燥箱:温度可控制在60-280士2'C;5-10刻度吸管c1mL;5.11刻度吸管:5mL;5门2磨口三角瓶

4、:ioomL;5.13容量瓶;1OOOmL;5.14培养皿:090mm;5.15三角瓶:500mL;5.16搪瓷量杯:1OOOmL,6试验前的准备6.1培养基的制备称取下列试荆:牛肉膏3.Og;蛋白陈10.Og;氯化钠5.Og;琼脂工5.Og,将V-述试剂加水约95OmL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，并用热水补充至1OOOmL。用氢氧化钠溶液(4.5)或盐酸溶液(4.6)调节pH值至7.2士2，并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用

5、蒸汽压力灭菌器121士1'C灭菌15min.6.2无菌稀释水的制备6.2.1生理盐水的配制:称取8.50g氯化钠溶解在1OOOmL水中，混匀。6.2.2将生理盐水(6.2.1)分装在100mL磨口三角瓶中，每个三角瓶塞子和瓶口间插入一小纸片，塞紧瓶塞每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力灭菌器121士1℃灭菌15min,63刻度吸管的灭菌6.3门将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10-15mm，棉花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6.3-2每支刻度吸管用1条约40-50mm

6、宽的牛皮纸条，以450左右角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部粗端用多余的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于16012C灭菌2h.6.4培养皿的灭菌个左右叠在一起，用牛皮纸卷成一筒，置电热干燥箱中，于160士2'C将洗净并烘干后的培养皿10灭菌Zh。Gs/'r14643.1-936.5石英砂灭菌将洗净烘干后的石英砂装入磨口三角瓶中，按(6.2.2)包扎、灭菌。了测定步骤71样品的采集1.1采集粘泥装置见下图。I一转子流量计;2-浮游生物网,a-tux-10截止钾;a-Xd3W-10旋塞润

7、;5--量筒7.1.2调节采样装置中阀门，使冷却水的流速控制在。8m/。左右，水流量在1m'/h左右，然后关上浮游生物网旋塞阀，过滤lm，水。7.1.3关闭水阀，取下浮游生物网，打开旋塞阀，将粘泥收集在500mL量筒内，用自来水冲洗滤网，洗涤液也收集在500MI.量筒内，沉淀30min后倾出上层清液。将剩余浊液转移至25mL量筒内，静止30min，记录沉淀出的粘泥体积。以ML/ms表示循环冷却水中的粘泥量，粘泥量(V)按式(<1)计算:v一V2(1)F1式中。VI量筒中粘泥体积，。L;V,—通过浮游生物网过滤的循环水量

8、,m3,7.1.4用无菌吸管移去25mL量简内的上清液，将量筒内的粘泥或部分粘泥(7.1.3)转移至洗净并烘千后瓷研钵中，加入约2g灭过菌的石英砂(6-5)，充分研磨后转移至1000ML洗净并烘干后的容量瓶中，用无菌稀释水稀释至刻度，充分混匀，并立即进行测定。了.2无菌箱(室)灭菌把试验所用的无菌稀释水，无菌培养皿、无菌吸管等用品