GBT14643.2-1993 工业循环冷却水中土壤菌群的测定 平皿计数法.pdf

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1、中华人民共和国国家标准工业循环冷却水中土壤菌群的测定GB/T14643.2一93平皿计数法Industrialcirculatingcoolingwater-Examinationofsoilmicro-bioti-Standardofplatecount1主题内容与适用范围本标准规定了工业循环冷却水中土壤菌群的测定方法。本标准适用于工业循环冷却水中土壤菌群的测定，也适用于原水、生活用水及其他水中土壤菌群的测定。2引用标准GB603化学试剂试验方法所用制剂及制品的制备GB6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要本方一法采用混合培养基，利用平皿计数技术，在29士1℃培养72h,

2、测定循环冷却水中土壤菌群总数。4试剂和材料本试验方法中除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB6682中三级水规格的水。4.1牛肉膏:生物试剂;4.2蛋白陈:生物试剂;4.3琼脂:生物试剂;4.4氯化钠(GB1226);4.5硝酸钠(GB636);4.6磷酸氢二钾(HG3-1228)4.7氯化钾(GB646);4.8硫酸镁(GB671);4.9硫酸亚铁(GB664);4.10蔗糖(HG3-1001);4门1土壤(果园土、菜园土);4.12氢氧化钠(GB629)溶液:40g/L;4.13乙醇(GB678)溶液:75%(V/V);4.14硫代硫酸钠(GB637);_.--------一

3、-，，，，，国家技术监督局1993一08一06批准，994一07一01实施.www.bzxzk.com.Gs/T14643.2-934.15牛皮纸;4.16医用脱脂棉;4.17医用脱脂纱布。5仪器和设备常规微生物实验室设备和:5.1无菌箱(室)或超净工作台;5.2蒸汽压力灭菌器;5.3生化培养箱;5.4鼓风电热干燥箱:温度可控制在60-280士20C;5.5铝锅:0200mm;5.6搪瓷量杯:1000mL;5.7磨口三角瓶;100mL;5.8培养皿:090mm;5.9磨口试剂瓶:1OOOmL;5.10刻度吸管:1mL;5.11刻度吸管:5m:L;5.12:三角瓶:500mL,6试验

4、前的准备6.1土壤浸出液的制备称取约100g土壤加入300g水中，采用燕汽压力灭菌器在121土1℃灭菌15min，静置24h后第二次灭菌，再静置24h后进行第三次灭菌。瓶中的上层清液为土壤浸出液。6.2培养基的制备称取下列试剂:牛肉膏:1.5g;蛋白陈:5.Og;氯化钠:2.5g;硝酸钠:2.5g;磷酸氢二钾:。.5g;氯化钾:。.2g;硫酸镁:。.25g;硫酸亚铁:0.005g;蔗糖20.0g;土壤浸出液:5mL;琼脂:15.Og,将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，用热水补充至1OOOml，用氢氧化钠溶液调节pH至7.。士0.

5、2，并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其总量的三分之二。塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器于121士1℃灭菌15mina6.3无菌稀释水的制备6.3.1生理盐水的配制:称取&5g氯化钠，溶解在1OOOmL水中，混匀。6.3.2将生理盐水(6.3.1)分装在1OOOmL磨口三角瓶中，每瓶45mL，每个三角瓶塞子和瓶口间插入一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力灭菌器于121士1℃灭菌.www.bzxzk.com.GBIT14643.2-9315min6.4刻度吸管的灭菌6.4.1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，

6、长度大约10-15mm,棉花不宜露在口外多余的棉花可以用火焰烧掉。6.4.2得支刻度吸管用一条约40-50m。宽的牛皮纸条，以45”左右角度螺旋形蜷起来，吸管的尖端在头部，粗端用多余的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若干支捆成一束，置电热干燥箱中，于160士2'C灭菌2h,65培养皿的灭菌将洗净并洪干后的培养皿10个左右叠在一起，用牛皮纸持成一筒，置电热干燥箱中于160士2℃灭菌2he6,6采样瓶的灭菌将洗净并烘干后的1OOOmL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好，扎紧，置电热干燥箱于160士ZC灭菌Zh。6.了硫代硫酸钠灭菌将硫代硫酸钠放入无菌箱(室)内，并均匀地摊在离紫外线灯3

7、0cm处，灭菌30mino7测定步骤了1水徉的采集7.1.，用无菌采样瓶采集被测样品，在采样过程中，要保护瓶口和瓶颈，防止这些部分受杂菌污染。瓶内要留下足够的空间，以备侧定之前摇晃.了.，2若采集的水中有余氯，应于采样前在无菌操作下于无菌采样瓶(6.6)中加入灭过菌的硫代硫酸钠(6.7)，加入量为每升水样约0.1g,7.1.3水样采集后应立即进行测定，如果2h内不能进行测定，应把水样放在冰箱中，于4-10℃保存，保存时间不宜超过24h,经冷冻保存后的水样需测定时，从冰