人胰腺癌细胞CFPAC1裸小鼠原位移植瘤模型的建立.doc

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1、人胰腺癌细胞CFPAC1裸小鼠原位移植瘤模型的建立【摘要】目的：建立人胰腺癌裸小鼠原位移植瘤模型，并对其生物学特性进行研究。方法：将人胰腺癌细胞CFPAC1接种于裸鼠皮下，并将皮下肿瘤组织原位移植于裸鼠胰腺，比较两种移植瘤的生长及转移情况。结果：胰腺癌皮下移植瘤模型与胰腺癌原位移植瘤模型的体内成瘤率、生长情况及形态学上均无显著差异。皮下移植瘤模型呈局限性生长，无一例发生远处转移；原位移植瘤模型远处转移率高达87.5％，发生75.0％腹膜转移，37.5％肝转移，12.5％肺转移，37.5％淋巴结转移，

2、并保持分泌CA199的特性。结论：人胰腺癌裸小鼠原位种植瘤模型明显优于皮下移植瘤模型，较好地模拟了人胰腺癌自然生长和局部浸润及远处转移过程，是胰腺癌体内研究理想的动物模型。【关键词】胰腺癌裸小鼠动物模型胰腺癌是一种恶性程度极高的肿瘤之一，在西方国家其死亡率列癌症死亡第4位。在我国胰腺癌的发病率也呈上升趋势，20年约增长6倍[1]，每年发病人数已达7.5万人，5年生存率＜5％。手术切除是胰腺癌能够达到根治的唯一选择，但大部分患者由于在确诊时已发生广泛转移而失去手术的时机，同时胰腺癌对放疗、化疗不敏感，因

3、此建立适宜的人胰腺癌动物模型，可以为深入研究胰腺癌的发生发展、侵袭转移机制以及寻找新的治疗策略提供有效的手段。1材料与方法1．1材料1．1．1细胞与细胞培养人胰腺癌细胞株CFPAC1购自中国科学院上海细胞生物研究所，用含10％热灭活的小牛血清（Gibco公司）、100U·ml-1青霉素和100μg·ml-1链霉素的高糖DMEM（Gibco公司）培养基作为CFPAC1细胞培养液，于5％CO2、饱和湿度、37℃的细胞培养箱内常规培养。1．1．2实验动物BALB/Cnu/nu裸小鼠，雌雄各半，4～6周龄，

4、体质量18～20g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物许可证号SCXK(沪)20070005，在我校实验动物中心SPF级动物房中分笼饲养，饲料、饮水、笼具和操作器材及其它用品均灭菌处理后使用，实验时按无菌原则操作。1．2方法1．2．1皮下移植瘤模型人胰腺癌细胞株CFPAC1体外常规传代培养，0.125%胰酶消化处于对数生长期细胞，冰冷的无菌磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3次，最后用PBS重悬成浓度为107ml-1的单细胞悬液。75％酒精棉球消毒裸小鼠皮肤，将(2～3)×106（0.24ml）的单细

5、胞悬液接种于裸鼠右肩背部皮下,建立皮下移植瘤模型。密切观察皮下肿瘤生长情况，每周用游标卡尺测量肿瘤大小，按公式V＝1/2长径×短径2，计算肿瘤体积，并绘制皮下移植瘤生长曲线。1．2．2原位移植瘤模型3周左右待皮下移植瘤长至1cm大小时，颈椎脱位法处死皮下荷瘤鼠，消毒皮肤，取下肿瘤，浸入含100U·ml-1青霉素和100μg·ml-1链霉素的高糖DMEM无血清培养基，去除中央坏死组织，选取周围健康肿瘤组织，剪成大小约1mm3瘤块供原位移植用。1％戊巴比妥钠溶液（50mg·kg-1）腹腔注射麻醉裸鼠，75％

6、酒精消毒皮肤，左上腹直肠旁线处行1cm的纵行切口，仔细分开胃与脾之间的薄膜，暴露胰腺，剪开胰腺被膜，将1mm3瘤块植入胰体尾处（图1），以80可吸收外科缝线缝合胰腺被膜。将胰腺轻轻送回腹腔，60可吸收外科缝线单层缝合腹壁肌层及皮肤。以上所有操作均在超净台内进行，术者佩戴外科手术放大镜。裸鼠均于术后第8周处死，收集标本待检。左↑示胰腺，右↑示脾脏图1外科手术原位移植Fig1Surgicalorthotopicimplantation.Theleftarrowshowspancreas,theright

7、onshowsspleen.1．2．3检测指标以上两组处死的裸鼠均经详细的解剖学检查，测量肿瘤体积，观察周围脏器侵袭及远处转移情况。收集肿瘤原发灶，以及所有可能发生侵袭、转移的脏器，如肝、肾、脾、肺、腹膜、淋巴结等标本，用10％中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，以4μm厚度连续切片，行HE染色，常规光镜检查确定转移灶。部分标本行CEA免疫组化染色。处死时心脏采血，收集血液，送至我院检验科检测肿瘤相关抗原CA199和CEA。1．3统计学处理计量资料和计数资料分别采用t检验和χ2检验进行统计学分析,P<

8、;0.05表示差异有统计学意义。2结果2．1移植瘤生长状况皮下接种经3～4d潜伏期，接种部位皮下可见灰白色结节，后呈圆形或椭圆形生长，每周测量肿瘤长径和短径，计算肿瘤体积，并绘制生长曲线(图2)。人胰腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤的成瘤率为100％(6/6)，且随时间的增加而增大,无自发消退现象。5周左右时皮下肿瘤长至2.154cm×1.375cm大小，接种部位皮肤出现破溃、结痂，8周处死时荷瘤鼠明显消瘦，呈恶病质状态。8只裸鼠接受原位移植，成瘤率