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《SNT1182.2-2004禽流感微量红细胞凝集抑制试验.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1182.2-2004禽流感微量红细胞凝集抑制试验Haernagglutination-inhibitiontestforavianinfluenza2004-06-01发布2004-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/T1182.2-2004月9舀本标准的附录A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国珠海出人境检验检疫局。本标准主要起草人:徐海聂、薛景山、播文波、廖秀云、周思波、王小玉。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准
2、。SN/T1182.2-2004禽流感微量红细胞凝集抑制试验范围本标准规定了用微量红细胞凝集抑制试验检测禽流感抗体的试验方法。本标准适用于禽类禽流感检疫、疫情监测和流行病学调查。2试剂和材料21试荆纯度2所有化学试剂均为分析纯。pH7.2,0.1mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)23配制方法见附录A.红细胞泥配制方法见附录A2.41%鸡红细胞悬浮液将鸡红细胞泥用PBS稀释成100悬浮液标准抗原禽流感H5,H7,H9等标准抗原。标准血清禽流感H5,H7,H9等标准阳性血清和标准阴性血清。2.7被检血清2,71无菌采取动物血液，凝固后离心分离血清，置于
3、4℃或一20℃保存备用。2.7.2除鸡外其余禽的血清需先确定是否存在非特异性凝集。有特异性凝集的，血清按下列方法进行处理:每。.5mL血清加251.L鸡红细胞泥，轻轻振荡，静置30min,2000r/min离心2min-5min，红细胞沉聚，取出吸附过的血清供检。2.8器材架盘天平、分析天平、离心机、V型微量血凝板、微型振荡器、可调移液器、恒温箱等。操作方法3.1微f血凝试验微量血凝试验见表表!禽流感微盈血凝试验孔号12345678910一1112抗原滴度Qogz)12345678910I对照{‘，PBS/PL25飞、25飞、L25125飞、25
4、飞、25飞、25飞_25飞、25飞、25飞、25飞_25抗原倍比稀释/kL25)、25J、51225J、25]、25]253、5]-25J、25]F-253一~~电PB.4/kL2525252525252525252525251%鸡红细胞/PL252525252525252525252525作用时间及温度室温(约20'C)下静置40min左右}二}二卜).⋯{...一{。.，:)，，.一{.判定举例I---】宁宁宁宁十州卜-卜-卜ITTT下}宁个十一十++}宁宁了，】宁宁宁宁I十十十州SN/T1182.2-20043.1.1在V型微量血凝板上，每
5、孔加人PBS25pL,3.1.2孔1加禽流感标准抗原25pL，反复吹打充分混匀，移出25VL至孔2;吹打混匀，移出25uL至孔3，依次类推作等量倍比稀释至孔11，孔11弃去251,L。孔12不加抗原设立为红细胞对照。3.1.3每孔加人PBS25pL,3.1.4每孔加人1%鸡红细胞悬浮液25t}工，立即置微型振荡器上振荡或手持血凝板绕圆圈混匀。3.1.5室温(约200C)下静置40min左右;如果室温太高，可在4℃静置约60min。对照红细胞呈明显的圆点状时进行抗原效价判定。完全血凝的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，即一个血凝单位(HAU).3.
6、1.64HAU抗原的标定3.1.6.1根据3.1.5测定的抗原的血凝效价，计算4HAU抗原的稀释倍数。例如表1抗原效价为2'(1，128)，其4个单位抗原效价为2'(1，32)，则将抗原稀释32倍。3.1.6.2将25pL含4HAU的抗原用PBS做等量倍比稀释，使每孔(25yL)含有2HAU,1HAU,0.5HAU,0.25HAU，每孔补加PBS25越，再加人1%鸡红细胞25IL，判定血凝图像与预期结果是否相符。2HAU,1HAU孔红细胞应出现完全凝集，0.5HAU孔红细胞应出现50凝集,0,25HAU孔红细胞应不凝集。若与此不符，应重新配制抗原
7、，测定效价。3.2微f血凝抑制试验微量血凝抑制试验见表2表2禽流感微里血凝抑制试验孔号123456789101112血清稀释度(log,)123356789101112P135/pL25飞25飞25飞25飞25飞25飞25飞25飞25飞25,25飞25飞被检血清倍比稀释PL25J25少I`25J25)}DI25J'25JI`25J2X2725)一4HAU抗原/WL252525252525252525252525作用时间及温度室温(约200C)下静置至少30min1%鸡红细胞/1+L2525252525一25}252525一252525作
8、用时间及温度室温(约200C)下静置约40min}，二1.，.，判定举例+++++，++州}丁下下]了，，，3.2.1在V型微量血凝板上
