布鲁氏菌病抗体快速检测新方法胶体金技术的应用研究

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1、万方数据医学动物防制2006年1月第22卷第1期布鲁氏菌病抗体快速检测新方法一胶体金技术的应用研究石杲1王树君2张杰2(1．内蒙古赤峰市疾病预防控制中心，0240002．克什克腾旗疾病预防控制中心)·9·摘要目的：研制一种敏感、特异、快速并适用于非专业人员快速诊断布鲁氏菌病抗体的胶体金法试剂盒。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记金黄色葡萄球菌A蛋白作为探针，同时用布鲁氏菌病可溶性蛋白多糖抗原致敏硝酸纤维素膜，共同组装成基于免疫层析原理的胶体金法快速诊断盒。结果：试管法检测正常阴性血清150份，胶体金法阴性149份，符合率9

2、9．34％。试管法检测1：i00、1：200、1：400的阳性血清150份，胶体金法阳性141份，符合率分别为92．oo％、94．oo％及96．oo％。两者阴性和阳性血清总符合率为95．50％。结论：布鲁氏菌胶体金法快速诊断试剂盒具有较好的特异性和敏感性，并且具有更简便快速的优点，适用基层单位现场使用。关键词布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析应用研究布鲁氏菌病(Brucellosis以下简称布病)是由布鲁氏菌属(Brueella)的细菌侵入机体，引起人畜共患的传染一变态反应性疾病，亦是自然疫源性疾病。染疫的家畜是人类布病的主要传染源。1860

3、年Morston对布病做了较为系统的描述，并根据其临床特点和尸体病理解剖将本病作为临床上一种独立的传染病提出，称之为”地中海弛张热”，临床上亦曾称为”波浪热”、”波状热“、”地中海热”及”马尔他热”等。布病传染性强、传播迅速，世界上约有160个国家和地区人、畜间有散发或暴发流行，我国除海南省未报道外，其余省、市、自治区均有布病发生。世界动物卫生组织(OIE)将其列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病，《中华人民共和国传染病防治法》将布病列为乙类传染病。1857年法拉第用还原法从氯金酸(HAuCl)溶液制备胶体金，并发现在其中加少量

4、电解质后，可使它由红色变成蓝色，终至凝集(自凝)为无色；而加明胶或其他大分子物质后便可阻止这种变化。他的重大发现奠定了胶体金制备和应用的科学基础，但直至1971年Faulk等把它用于细胞结构的透射电镜研究后，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法。从1979年起在免疫组织化学、免疫学、核酸探针及生物传感器等领域的深入研究和开发应用中取得了巨大进展，免疫胶体金技术是上世纪80年代继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术，成为重要标记物之一。1试剂1．1测定试剂：檀华等(2004)布病的胶体金法[1]，

5、其主要试剂和方法如下：氯金酸(HAuCl4H20)，分析纯，上海试剂厂；柠檬酸三钠(Na3C6H5072H20)分析纯，碳酸钾(KC03)分析纯，北京化工厂；金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)，由AmershamPharmaciaBiotech公司提供。分别制成布鲁氏菌可溶性蛋白多糖复合物抗原，金黄色葡萄球菌蛋白A(sPA)胶体金探针。在塑料底板上分别将吸水纸垫、硝酸纤维膜、金标垫及玻璃纤维膜样品垫组装而成。1．2供试人血清：临床确诊为布病患者血清标本，选择试管法检测均为阳性的标本用于本实验。正常人血清标本(试管法检测为阴性)。2方法2．

6、1操作步骤：2．1．1取待检血清标本10／z1，加生理盐水430／卫1(即按1：40稀释)，作为检测液备用。2．1．2取诊断盒一个，撕开外包装，取出布鲁氏菌病快速诊断盒，吸取血清标本检测液，滴加3～4漓(约150td)于诊断盒圆孔中，2分钟后开始观察结果，15分钟终止观察。于诊断盒窗口”C”(对照)处出现1条红色沉淀线，为布病血清学诊断阴性，即无布病感染；于诊断盒窗口”C”和”T”(对照和检测)处出现2条红色沉淀线，为阳性，即有布鲁氏菌感染；如试验中”C”(对照)处未出现沉淀线，说明诊断盒失效，应使用有效诊断盒重新试验。2．1．3试管

7、法按常规方法进行，试管法检测结果以≥1：100判定为阳性。3结果及讨论试管法检测正常阴性血清150份，胶体金法明万方数据·10性149份，符合率99．34％。试管法检测1：100、1：200、1：400的阳性血清150份，胶体金法阳性141份，符合率分别为92．00％、94．oo％及96．oo％。两者阴性和阳性血清总符合率为95．50％。这种新的布病抗体检测方法是一种敏感、特异、快速并适用于非专业人员的布病快速诊断的方法。而且仅需要2分钟15分钟就可以观察结果，较试管法提高效率30～60倍。该方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标

8、记金黄色葡萄球菌A蛋白作为探针，同时用布病多糖抗原致敏硝酸纤维素膜，共同组装成基于免疫层析原理的胶体金法快速诊断盒。其结论是布病胶体金法快速诊断盒具有较好的特异性和敏感性，不需要专门仪器，不需要进行专业培训，人员按说明书