hplc法测定蜂胶中高良姜素的含量

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1、万方数据604陕西中医2009年第30卷第5期HPLC法测定蜂胶中高良姜素的含量+王小平林励△白吉庆陕西中医学院(成阳712046)摘要目的：建立蜂胶中高良姜素的含量测定方法。方法：采用HPLC法，Diamonsil(钻石)C18(46mm×250mm，5／1m)色谱柱，甲醇一0．4％的磷酸水(65：35)为流动相，流速为1．0ml／rain，检测波长为256nm。结果：高良姜素在0．00412～0．02472mg／ml范围内呈良好的线性关系(R2=0．9998)。结论：本方法简便、可靠，能用于蜂胶中高良姜素的含量测定。主题词蜂胶／化学高良姜素／分析色谱法，高压液相蜂胶(propolis)是蜜

2、蜂从植物芽苞和树干处采集的树胶，混人蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡等形成的一种具有芳香味的胶状固形物，其主要化学成分为黄酮类、萜烯类、酚酸类化合物等多种生物活性物质n]。中国药典一部05版收载了该药材，作为抗菌消炎、调节免疫中药应用[2]。现代药理研究表明，蜂胶具有抗病毒、抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、调节机体免疫功能等多种生物活性作用[3]。我们对12批不同产地的蜂胶进行研究，发现高良姜素是不同产地蜂胶中均含有成分，并建立了蜂胶中高良姜素的含量测定方法。l仪器、试药与材料1．1仪器与材料德国DionexP680A型高效液相色谱仪(PDA一100检测器、STH585柱温箱、P680HPLC泵、AS

3、I—100自动进样器)，chromeleon色普工作站；8953Dietikon型电子分析天平(瑞士)；AS2060B型超声仪。1．2试药高良姜素对照品(111699—200501)由中国药品生物制品鉴定所提供，流动相所用甲醇为色谱醇，其他试剂如：甲醇，磷酸等均为分析纯，蜂胶(毛胶，产地：河南，由广州市宝生圆有限公司提供，经广州市蜂产品研究所卢占列鉴定，为蜂胶)。2方法与结果2．1色谱条件色谱柱：迪马公司Diamonsil(钻石)C18色谱柱(46mm×250mm，5弘m)；流动相：甲醇一0．4％的磷酸水(65：35)；流速：1．Oml／min，检测波长：256nm，柱温：25℃；进样量：lO

4、lL。2．2溶液的制备2．2．1对照品溶液：精密称取干燥至恒重的对照品高良姜素适量，加甲醇使溶解，制成每ml含高良姜素0．0206mg。2．2．2蜂胶供试品溶液：将蜂胶在一10℃冷冻数天后用粉碎机粉碎，取蜂胶样品约19，精密称定，置于*广州市科技计划项目(编号：2005Z--E0101)△广州中医药大学中药学院(广州510405)索氏提取器中，加100ml丙酮，加热回流至提取液无色，提取液回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至100量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取2ml置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2．3线性关系考察精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12ml，分别置于10

5、ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取10ul注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积对浓度线性回归，在0．00412～0．02472／mlL范围内呈良好的线性关系，回归方程Y=728．06X一0．2239，R2—0．9998。2．4样品测定分别吸取各供试品溶液lOlL，注入液相色谱仪，记录峰面积，由回归方程计算其含量，结果见表1。表1样品中高良姜素含量测定结果(i±s)3方法学考察3．1检测波长的确定在200～400nm波长范围内，对对照品溶液和供试品溶液进行扫描，根据各峰的紫外光谱曲线知各峰的最大吸收波长。综合比较，设置256nm、283nm、360rim、365nm四个波长对色谱条件进行考察

6、。综合考虑基线、峰形及信号响应强弱，确定256nm为最佳检测波长。3．2流动相的确定分别对常用的流动相系统及其不同比例进行等度洗脱试验。结果表明采用甲醇一0．4％的磷酸水(65：35)进行等度洗脱为佳。3．3精密度试验取同一供试品溶液(河南产)lOlL，连续进样5针，测定高良姜素的峰面积，其RSD为0．5％。表明仪器精密度良好。3．4稳定性试验取同一供试品溶液(河南产)lOlL，分别在0、4h、8h、12h、24h、48h注入液相色谱仪，测定高良姜素的峰面积，其RSD为0．8％。表明供万方数据陕西中医2009年第30卷第5期605试品稳定性良好，在48h内检测不影响效果。3．5重现性试验取同一

7、批号的样品6份(河南产)，按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，分别注入液相色谱仪10肛l，测定高良姜素的峰面积，其RSD为1．o％。表明本实验方法重现性好。3．6回收率试验精确移取iml样品溶液(河南产)5份置2．OOml容量瓶中，分别准确加入高良姜素对照品甲醇液lml(o．0206mg·m11)，取lOvl注入液相色谱仪，分别测定高良姜素的峰面积，并计算回收率，其回收率为99．80％(，2