苦玄参药材有效成分含量积累动态的研究

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1、苦玄参药材有效成分含量积累动态的研究作者：陈勇，刘婧，李兵，李立，李耀华【摘要】　　目的测定不同月份生育期的苦玄参中苦玄参苷ⅠA的含量，为苦玄参药材规范化种植提供实验依据。方法采用高效液相色谱法测定同一种植地采集实验样品中苦玄参苷ⅠA的含量，以C18ODS2柱为固定相，乙腈-%磷酸溶液为流动相，检测波长为26nm。结果苦玄参中苦玄参苷ⅠA的平均含量从当年6月份到次年1月份分别为%，%，%，%，%，%，%，%，以7、8月份含量较高。结论所建立的含量测定方法灵敏度高，专属性强，重复性好，以药材中苦玄参苷ⅠA的含量高低

2、为标准，苦玄参最佳采收时间应为当年7、8月份。【关键词】苦玄参　苦玄参苷IA　高效液相色谱法　积累动态苦玄参，又名苦草、蛇总管，为玄参科植物苦玄参Picriafel-tarraeLour的干燥全草，产于我国广西、广东、云南和贵州等地，该药已收载于《广西中药材标准》1990年版。苦玄参为一年生草本植物，在广西民间作为药用已有很长的历史，其性寒味苦，主治风热感冒、咽喉肿痛、痄腮、疖肿、泄泻痢疾、痔疮、湿疹，毒蛇咬伤、跌打损伤等，具有清热解毒，凉血消肿之功效［1］。本实验研究将为确定广西苦玄参药材的最佳采收期，深入研究

3、该药材质量，制定和提高该药材的质量标准，提高相应中成药产品质量和市场竞争能力，规范化种植该药材提供实验依据。1材料与仪器材料苦玄参药材分别于XX06～XX01采收，每月采收1次，批号依次为XX06，XX07，XX08，XX09，XX10，XX11，XX12，XX01。样品均采自广西中医学院药用植物园并经药学院刘寿养副教授鉴定为玄参科植物苦玄参Picriafel-tarraeLour的干燥全草；苦玄参苷ⅠA对照品由广西桂林植物研究所植化室梁小燕老师提供，经HPLC归一化法检测，含量达到%以上。试剂甲醇、乙腈，其

4、他试剂均为分析纯。仪器Agilent1100高效液相色谱仪，含在线真空脱气机(G-1322A)，高压四元梯度泵(G-1311A)，标准自动进样器(G-1313A)，智能化柱温箱(G-1316A)，可变波长检测器(G-1314A)，二极管阵列检测器，Agilent1100series色谱工作站(美国安捷伦科技公司；CG-16W高速微量离心机；SB3200-T超声波提取器；MilliporeSimplicity-185超纯水器；BP211D电子分析天平。　2方法.1分析测定方法学研究.色谱条件色谱柱为C18ODS2柱

5、(×250mm，μm，大连依利特公司)；检测波长26nm；流动相为乙腈-％磷酸溶液；流速1ml/min；柱温30℃；进样量10μl；理论塔板数以苦玄参苷IA峰计应不低于000。.对照品溶液制备精密称取苦玄参苷ⅠA对照品适量，置10ml量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为/ml的对照品溶液。.供试品溶液制备取苦玄参药材干燥粗粉约g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇2ml，称定重量，超声处理30min，放冷，用75%甲醇补足损失的重量，滤过，滤液备用。取上述滤液置微型离心管中，以

6、10000r/min速度离心10min，取上清液备用，即得。.标准曲线制备分别精密吸取上述苦玄参苷ⅠA对照品溶液(/ml)，，，，和ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。分别取上述稀释溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面积值。以峰面积为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，并求出回归方程为：Y=+，r=。结果表明苦玄参苷IA进样量在～μg间呈良好线性关系。结果见表1。色谱图见图1。表1苦玄参苷IA线性关系考察结果.精密度实验取同一批供试品溶液10μl，注入液相色谱

7、仪，重复进样5次，测定苦玄参苷IA峰面积值，RSD=%。结果见表2。表2精密度实验结果.重复性实验取同一批苦玄参药材干燥粗粉约g，精密称定，共取5份，按样品测定项下方法进行含量测定。结果RSD=%。见表3。表3重复性实验结果　　　　稳定性实验取同一批供试品溶液在制备后0，2，4，8，12，2h分别进样10μl，测定苦玄参苷IA峰面积值，RSD=%，表明供试品溶液在2h内稳定。结果见表4。表4稳定性实验结果.加样回收率实验取已测知苦玄参苷ⅠA含量的供试品干燥粗粉约1g，精密称定。分别精密加入一定量的苦玄参苷ⅠA对照

8、品溶液ml，按供试品溶液制备方法制备待测溶液，按上述色谱条件测定，计算加样回收率。结果见表5。.2样品测定与结果.样品测定分别取不同月份的苦玄参干燥粉末约g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备，注入液相色谱仪，测定峰面积值。结果见表6。色谱图见图2。表5加样回收率实验结果表6不同生长月份苦玄参中苦玄参苷IA含量.结果分析本实验样品的收集从苦玄参种植当年6月份起至次年1月，