槲皮素抑制胃癌BGC823细胞增殖的研究

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1、槲皮素抑制胃癌BGC823细胞增殖的研究作者：徐永中，范钰，姚广涛，李仪奎【摘要】　　目的探讨槲皮素治疗胃癌细胞的作用机制。方法采用不同浓度的槲皮素处理胃癌BGC82细胞后，采用四唑盐比色试验检测癌细胞生长，分别以琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞凋亡，分别采用荧光实时定量PCR和Westernblot检测存活素基因mRNA、蛋白表达情况。结果槲皮素抑制胃癌BGC82细胞的恶性增殖，且呈浓度依赖性；琼脂糖凝胶电泳和TUNEL显示，槲皮素处理组出现凋亡现象，且呈浓度依赖性。槲皮素处理组survivin基因mRNA、蛋白表达

2、下调，且呈时间和浓度依赖性。结论槲皮素体外能抑制胃癌细胞的恶性增殖，与诱导凋亡、下调survivin基因表达有关。【关键词】胃肿瘤槲皮素细胞凋亡存活素Abstract：ObjectiveToidentifytheinhibitoryeffectsandmechanismofQuercetinongastriccancerBGC82cellsweretreatedwithdifferentdosesofquercetin,andthegrowthofcancercellwasexminedbyMTTassay,andthea

3、poptosisweredeterminedbyagarosegelelectrophoresisandTUNELassays,realtime-PCRandwesternblotwereperformedtostudytheexpressionofhadaremarkableinhibitionongastriccancercelllineDNAladderandTUNELassay,apoptosiswereinducedincancercellstreaedwithquercetin,inadose-dependen

4、taddition,quercetinresultedindown-regulationofsurvivinmRNAandprotEinfromrealtime-PCRandwesternblotcaninhibitthegrowthofhumangastriccancerBGC82cellthroughinducingapoptosisanddown-regulatingsurvivingeneinvitro.Keywords：Gastriccancer;Quercetin;Apoptosis;Survivin胃癌是我国

5、最常见的恶性肿瘤之一，发现时一般已经处于中晚期，目前尚缺乏有效的治疗手段，故寻找有效的治疗药物和治疗手段是当务之急。槲皮素(quercetin)是一种天然的黄酮类化合物，广泛分布于蔬菜、水果及常见中草药之中。已有研究发现，槲皮素可抑制多种肿瘤细胞的增殖［1，2］，是颇具应用前景的抗癌药物之一，但内在机制尚不清楚，且目前尚无对胃癌细胞作用的报道。1材料与方法材料　　槲皮素，购自Sigma公司，用DMSO(二甲基亚砜)配成储液，-20℃冰箱保存。实验时用1640培养基稀释，DMSO的最终浓度小于%。人胃癌细胞株BGC82购自中

6、科院上海细胞所细胞库。TriIzol试剂购自Invitrogen公司。BCA蛋白分析试剂盒购自PIERCE公司。细胞凋亡原位检测试剂盒，购自Roche公司。细胞培养及处理胃癌BGC82细胞在37℃，5%CO培养箱中培养，培养液为含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI-1640。待细胞至指数生长期，收集细胞，调整细胞浓度为1×104/ml，按每孔ml接种到孔培养板中，2h后，分别加入不同浓度的槲皮素，设个复孔，培养h，每孔加入MTT100μl，作用h后，加入DMSO100μl，孵育0min，

7、在酶标仪70nm处测吸光度A值，计算抑制率。细胞凋亡检测DNA末端原位标记染色法接种胃癌细胞于孔板，以不同浓度的槲皮素处理，4h后终止细胞培养，4%多聚甲醛固定0min。其余步骤按Roche公司药盒说明书进行。光镜下计算凋亡指数。凋亡指数计算方法：数5个高倍镜＞1000个细胞，分别计数总细胞数量和凋亡细胞数量。AI＝凋亡细胞数/总细胞数×100％。琼脂糖凝胶电泳按照文献［3］的方法进行琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下检测并拍照。Survivin基因表达检测mRNA水平应用荧光实时定量PCR方法检测。以Trizol抽提细胞总RNA，

8、取总RNA1μg，以OligodT为引物逆转录合成cDNA第1链，以此cDNA链μl为模板进行PCR扩增，步骤参照说明书。引物序列为：上游：5'-ATTTGAATCGCGGGACCC-3'；下游：5'-GAGAAAGGGCTGCCAGGC-3'。FAM探针：5'-CATGGGTGCCCCGACGTTGC