反相高效液相色谱法测定附子中乌头碱等3种成分的含量

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1、反相高效液相色谱法测定附子中乌头碱等3种成分的含量邓雅琼，刘荣华，邵峰，卢锋【摘要】　　目的测定附子中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量。方法采用反相高效液相色谱（PR-HPLC）法，使用UltimateTMXB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为乙腈-0.2%冰醋酸（浓氨水调节pH值为7.29）；检测波长：230nm；流速1.0ml·min-1；柱温为35℃。结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的回归方程分别为：Y=31.258X+5.794，r=0.9999；Y=17.418X+5.2369，r=0.9

2、998；Y=18.989X+6.1866，r=0.9997。三者的线性范围分别为：3.3125～106μg/ml；0.7357～23.5419μg/ml；1.9661～62.9164μg/ml。结论该方法简便、准确、分离效果好、灵敏度高,可用于附子的质量控制。【关键词】附子反相高效液相色谱乌头碱新乌头碱次乌头碱　　Abstract：ObjectiveTodevelopahighperformanceliquidchromatography(HPLC)methodforthedeterminationofthreepr

3、incipalalkaloidsinaconiteroot.Methods（4.6mm×250mm,5μm）columnbyisocraticelutionusingAcetonitrile-0.2%Glacialaceticacid（adjustedtopH7.29monia）.ResultsTheaveragerecoveryofthethreealkaloidsultaneouslyateTMXB-C18ratesobtainedesaconitinel,0.7357～23.5419μg/ml,1.9661～6

4、2.9164μg/ml(r=0.9999,r=0.9998,r=0.9997).ConclusionThecontentsofalkaloidsinaconiterootvariedsignificantlyfromspecies;hencequalitycontrolofaconiterootisverynecessary.　　KeycarmichaeliDebx.的子根加工品〔1〕。附子性大热，味辛、甘，有毒，具回阳救逆，补火助阳，散寒止痛等功效，具有强心、降压、抗炎和镇痛等作用。附子中生物碱主要有乌头碱、新乌头

5、碱、次乌头碱等双酯型生物碱为剧毒化合物，附子经过炮制后，其生物碱的含量下降，为控制药物的毒性，检测附子中双酯型生物碱的含量是非常必要的。　　附子生品有大毒，其中所含的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱等双酯类生物碱既是有效成分，又是毒性成分，且治疗量与中毒量接近，经加工炮制后此类成分可转化为单酯型生物碱，从而减小毒性。附子的毒性与炮制方法有关，炮制不及，则可中毒；炮制太过，则不能保证药效〔2〕。目前并没有能够同时控制毒性和保证疗效的炮制工艺规范，也不能够表明附子安全性和有效性的科学、量化的质量标准，造成各地附子炮制品的质量相

6、差很大。为此本研究建立了灵敏准确的检测方法，对附子炮制品中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱进行了定量分析，为有效地评价和控制附子炮制品质量，规范炮制工艺提供科学依据。　　1仪器与试剂　　1.1仪器Agilent1200高效液相色谱仪，G1314BVXB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：乙腈-0.2%冰醋酸（氨水调pH为7.29），过0.45μm滤膜；检测波长：230nm；流速：1.0ml·min-1；柱温35℃。　　2.4测定方法在选定的色谱条件下，分别吸取混合对照品溶液和供试品溶液10μl，注入高效液

7、色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，按外标法计算各生物碱的含量。　　3结果　　3.1方法的专属性精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液、空白溶液10μl，在选定的色谱条件下进样分析，乌头碱、次乌头碱、新乌头碱峰形良好，基线平稳。本方法能准确测定乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的浓度，灵敏度较高，见图1。　　图1高效液相色谱图（略）　　3.2HPLC方法学评价　　3.2.1线性关系考察分别精密称取“2.1”项下混合对照品储备液10，20，100，200，400，1000μl置1ml容量瓶中，加乙腈定容至刻度线，摇匀，分别进样10μl

8、，按上述色谱条件进行HPLC分析，以峰面积Y对样品浓度(μg/ml)进行回归处理，得到乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的回归方程分别为：Y=31.258X+5.794，r=0.9999；Y=17.418X+5.2369，r=0.9998；Y=18.989X+6.1866，r=0.9997。　　三者的线性范围分别为：3.3125～106μg/ml；0.