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1、纤维蛋白原Bβ148C/T基因多态性 【Abstract】AIM:ToanalyzethefrequencyofFgBβ148（C→T）polymorphismin77patientsorphismofFgBβ148（C→T）entlengthpolymorphism(RFLP).RESULTS:TheoverallallelefrequencyofFgBβT148(C148)orphism；cerebrovasculardisease 【摘要】目的：对河北省脑血管患者纤维蛋白原(Fg)Bβ148C/T基因多态性进行初步研究.方法：用聚合酶链式反应（PCR），限制性片段长度多
2、态性（RFLP）方法研究河北省77例脑血管病患者FgBβ148C/T基因多态性.结果：77例脑血管病患者FgBβ148基因频率C=0.364,T=0.636.结论：FgBβ148C/T突变基因T与Fg水平、严重的颈动脉粥样硬化明显相关. 【关键词】纤维蛋白原Bβ148；基因多态性；脑血管病 0引言 杨志刚等［1］发现携带突变基因T148，A448和A445的血浆纤维蛋白原（fibrinogen，Fg）水平较野生型显著升高.我们对河北省脑血管病患者77例的血浆Fg水平进行了分析，并研究其血浆FgBβ148C/T基因多态性与颈动脉粥样硬化的关系如下. 1材料和方法 1.1材
3、料 血浆FgClauss测定法试剂盒购自上海医科大学华山医院技协生物试剂公司上海鹰跃试剂厂；引物：上游引物5′CCTAACTTCCCATCATTTTGTC3′，下游引物5′ATGGTTTTAAGTTTGTGGAAGC3′由北京博润汇力基因技术有限公司(合成)；PCR扩增试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司；UNIQ10柱式DNA胶回收试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司；100bpDNAladder购自华美生物工程公司；HindⅢ为Promega产品. 1.2方法 住院脑血管病患者77(男67,女10)例,其中短暂脑缺血发作（TIA）9例，椎基底动脉供血不足8例
4、，脑梗死51例，脑出血9例.取早晨空腹肘静脉血分别用38g/L枸橼酸钠及20g/L二胺四乙酸(EDTA)抗凝.枸橼酸钠试管取2.7mL血，用Clauss测定试剂盒检测Fg浓度.另取晨空腹肘静脉血4mL置20g/LEDTA抗凝管(每管2mL),立即颠倒摇匀,于4℃静置,血浆置-70℃冻存,采用改良盐析法提取基因组DNA.PCR扩增体系为：10×PCRbuffer2.5μL，25mmol/LMgCI22μL，2mmol/LdNTP1μL，10pmol/μL引物各1μL，模板DNA1μL，1MU/LTaqDNA聚合酶1μL，加灭菌双蒸水至溶液体积为25μL，混匀后以石蜡油50μL覆盖.
5、PCR热循环条件为:94℃预变性2min，然后94℃45s，58℃45s，72℃45s35个循环，72℃延伸5min，4℃浸泡.20g/L琼脂糖凝胶电泳,1×TAE缓冲液中电泳35min后,紫外检测仪观察.切取300bp左右条带，采用UNIQ10柱式DNA胶回收试剂盒,回收DNA,-20℃保存备用.取回收DNA10μL，加入BSA0.2μL，10×Buffer2μL，10MU/LHindⅢ酶1μL，双蒸水6.8mL,37℃孵育3h，30g/L琼脂糖凝胶电泳30min后,紫外检测仪分析电泳结果.FgBβ148位点突变纯合子(T/T基因型)缺乏HindⅢ酶切位点,酶切后仅见与PCR扩
6、增产物一样的300bp片段,野生型(C/C基因型)酶切后可见202bp和98bp两个片段,突变杂合子(C/T基因型)酶切后可见300，202及98bp三个片段.用基因计数法计算等位基因频率. 统计学处理：各组血浆Fg用x±s表示，两组间差别统计采用t检验，多组差别比较，用方差分析和SNKq检验. 2结果 PCR扩增产物电泳后可见77个样品都在300bp左右有一清晰条带(Fig1).回收PCR扩增产物，用内切酶HindⅢ酶切结果见Fig2.脑血管患者77例血浆FgBβ148基因频率C=0.364,T=0.636(Tab1).表1脑血管病患者FgBβ148多态性频率与血浆Fg水
7、平（略） 3讨论 血浆Fg的升高可作为心脑血管疾病的危险因素［2,3］.FgBβ基因多态性单独或与环境因素作用使循环中的Fg水平升高，造成或加速了动脉粥样硬化.T/T基因型与严重的颈动脉粥样硬化密切相关，纯合子T/T基因型增加颈动脉粥样硬化的风险OR=6.17，远远超过了C/C或C/T型，推测为一种短暂的不依赖Fg水平的Fg启动基因，重复着固有的、非固有的刺激，在颈动脉粥样硬化病因学上起一定作用.吕波等［4］对冠心病和急性脑梗死患者FgBβ148Ｃ/Ｔ基因进行研究发现患者此基
