丹红注射液对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响

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1、丹红注射液对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响睡眠剥夺(sleepdeprivation,SD)是一种特殊的生理心理状态，可引起机体认知功能、情绪、行为及免疫功能等一系列改变[1]。既往有研究表明[2]，SD可影响动物的学习记忆能力。在战争环境下或特殊职业里，SD是不可避免的。因此，为了保证作业人员的安全与健康，保证作战和特殊职业工作的需要，探讨减少SD对机体影响的措施具有十分重要的意义。我们着眼于中药领域，采用动物行为学的方法，试图去了解丹红注射液(Danhonginjection)对SD的对抗作用，并检测海马中胶质纤维酸性蛋白(GlialFi

2、briliaryAcidicProtein，GFAP)的表达规律，以期阐明其可能机制。　　1材料和方法　　1.1动物及分组成年、健康)时，由于骨骼肌的松弛使大鼠掉入水中而惊醒，如此反复多次造成REM的剥夺。在大鼠活动空间内给予12h/12h明暗交替，室内温度控制在18~22℃。　　1.3水迷宫组成Morris水迷宫由北京硕林苑公司生产。包括一直径150cm、高60cm的圆形不锈钢水池，内壁黑色，置有直径15cm、高25cm的透明有机玻璃平台，以及水迷宫测试系统。实验时，平台隐藏在水下2cm，水温保持在(22±0.5)℃。池壁上标有东南西北

3、4个入水点，它们将水池划分为4个象限，在任意一象限区中间放置平台，平台没于水下2cm。水池周围围有窗帘尽量消除外界影响，池壁水面上贴有不同颜色不同形状纸片。在实验过程中，保持环境安静。大学生论文发表　　1.4行为实验实验分为定位航行试验和空间探索试验两个部分。　　1.4.1定位航行实验(placenavigationtest，PNT)每天08：00~11：00之间对每只大鼠进行训练，不选平台所在象限作为入水点，按顺时针方向把大鼠面向池壁放入水中，检测大鼠隐匿平台潜伏期。如果在规定的最长时间120s内未到达平台，则由实验者将其引至平台，逃避

4、潜伏期记为120s，大鼠在平台休息20s后进行下1次测试。观察并记录动物找到并爬上平台的潜伏期、游泳路程及游泳轨迹。3d训练结束后将大鼠按组别放入睡眠剥夺箱。SD时间点到后进行最后1次PNT，记录平均潜伏期、平均游泳路程作为该只大鼠所得成绩。　　1.4.2空间探索实验(spatialprobetest，SPT)各组大鼠最后1次PNT后撤除平台，将大鼠从最后1次入水点面向池壁放入水中，使大鼠在水迷宫中连续游泳，记录大鼠120s内穿越原平台平面的次数。　　1.5海马GFAP的测定各组大鼠最后1次水迷宫测试完后，在10%水合氯醛麻醉下用0.9%

5、生理盐水200ml经心脏快速灌注冲洗，再用4%多聚甲醛(用0.1MPB配制，pH7.2~4.4)200ml灌注取脑后固定。包埋，定位海马，冠状面切片，片厚3μm;抗原热修复后依次加入3%H2O2、10%山羊血清封闭液，各在37℃温箱孵育10min，加入1∶100GFAP抗体，于4℃冰箱过夜，滴加二抗工作液及辣根酶，DAB显色，光镜下观察胞质呈棕黄色为阳性细胞。对照组染色步骤相同，阴性对照用PBS代替一抗。　　1.6数据处理切片在统一放大倍数(10×40)下随机选5个视野，输入图像分析系统，以光密度值(Opticaldensity)表示GF

6、AP的含量，计算其均值。实验数据均采用SPSS16.0软件进行统计，进行单因素方差分析和组间t检验。　　2结果　　2.1睡眠剥夺大鼠Morris水迷宫测试各组大鼠SD后Morris水迷宫测试游泳潜伏期及路程均延长，实验组和对照组不同SD时间之间有统计学差异(P<0.01)，穿越平台次数下降不明显(P>0.05)。与对照组相比，实验组2，3d及5d组潜伏期缩短(P<0.05)，4d组潜伏期缩短(P<0.01);实验组2d及5d组游泳路程缩短(P<0.05)，3d及4d组游泳路程缩短(P<0.01);实验组

7、及对照组之间，穿越平台次数无明显变化(P>0.05)，差异无统计学意义(表1～3及图1~3)。表1睡眠剥夺大鼠Morris水迷宫测试潜伏期比较图1睡眠剥夺大鼠Morris水迷宫测试潜伏期比较表2睡眠剥夺大鼠Morris水迷宫测试路程比较　　2.2睡眠剥夺大鼠海马组织GFAP的检测各组大鼠SD后海马中GFAP含量均增高，实验组和对照组不同SD时间之间有统计学差异(P<0.01)，形态学上表现为海马区GFAP阳性细胞增多，胞体变大，突起增粗增长。与对照组相比，实验组2d及3d组GFAP含量增高(P<0.05)，4d及5d组G

8、FAP含量增高(P<0.01)，实验组和对照组之间有统计学差异(表4及图4)。3讨论　　小平台水环境法(“flol/kg为给药剂量，给药1次/d，连续给药7d，给药完毕即进行SD。图2睡