吡格列酮对家兔局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

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1、吡格列酮对家兔局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响　　[]目的探讨吡格列酮对脑缺血再灌注损伤家兔细胞凋亡的影响及其机制。方法40只雄性家兔随机分为5组：①假手术组（S组，n=8）；②模型组（M组，n=8）；③吡格列酮组（P组，n=8）；④GSO组（D组，n=8）。除S组外，其余各组均通过线栓法建立家兔大脑中动脉阻塞（MCAO）再灌注损伤模型。于术前30min分别给予相应处理。缺血120min再灌注24h后，对家兔进行神经功能评分；HE染色观察病理形态学，TUNEL检测神经细胞凋亡。结果①与S组比较，M组神经功能评分明显增加（P<0.05）；与M组比较，P组神经功能评分明

2、显降低（P<0.05）。②与S组比较，M组凋亡细胞明显增加（P<0.05）；与M组比较，P组凋亡细胞明显降低（P<0.05）。结论吡格列酮可通过减轻形态学改变、抗神经细胞凋亡，对神经细胞发挥保护作用。　　[关键词]吡格列酮；G组）；③吡格列酮组（P组）；④GSO组（D组）。　　1.2试剂　　吡格列酮、GSO）（Sigma公司，美国）；原位末端标记（TUNEL）试剂盒（Promega公司）；电子显微镜（Olympus，日本）等。　　1.3动物模型制备及处置　　M组：术前20min经耳缘静脉注射生理盐水2mL/kg，采用改良的Zea-longa[3]法制备家兔大

3、脑中动脉阻断（MCAO）模型。缺血120min后抽出线栓即可造成再灌注模型。模型成功标志：苏醒后出现左侧Horner综合征；爬行时向右侧转圈或跌倒。P组：术前20min经耳缘静脉注射吡格列酮10mg/kg。GP组：术前20min先经耳缘静脉注射GSO2mL/kg。S组：术中分离左侧CCA、ICA及ECA，但不做任何缺血处理。　　1.4指标检测　　1.4.1神经功能评分再灌注24h后采用双盲法按Zea-longa5分法进行神经功能评分，标准如下：①无神经功能缺失症状，计0分；②不能伸展右侧前肢，计1分；③爬行时向右侧转圈，计2分；④身体向右侧倾倒，计3分；⑤不能自发爬行、意识障

4、碍，计4分。　　1.4.2HE染色将各组8只家兔麻醉，以生理盐水进行心脏灌洗，用4℃10%多聚甲醛灌洗固定，并迅速断头取脑。距额叶前端3mm和9mm处进行冠状分离，取中间6mm厚的脑组织块，然后沿此脑块矢状缝两侧约2mm处，从上至下切去两侧半球的正中结构，将左侧脑块作为缺血脑组织，制成蜡块。自前往后连续冠状位切片，厚约5μm。HE染色光学显微镜下（400）观察神经细胞形态学变化并采图。　　1.4.3TUNEL染色严格按照试剂盒检测步骤进行操作。TUNEL染色在光镜下（400）观察凋亡细胞（以胞核出现棕黄染色颗粒代表），计算TUNEL阳性率即TUNEL阳性细胞数占总细胞数

5、的比值并采图。　　1.5统计学处理　　应用SPSS17.0软件进行统计学分析。神经功能评分中位数/四分位数法表示，多组间比较采用Kruskal-组最迟钝，P组最佳。5组家兔神经功能评分比较见表1。　　2.2HE染色的比较　　切片经HE染色后，光镜下可见S组神经细胞形态正常，胞质色淡且均匀，核大而圆，核仁明显（图1A）。M组呈明显的缺血损伤性改变，多数细胞体积缩小，胞浆疏松，胞核固缩深染，部分细胞坏死（图1B）。经吡格列酮预处理的P组缺血性损伤改变较M组明显减轻，坏死区域缩小（图1C），而GP与D组较M组的缺血改变则无明显减轻，可见神经细胞正常结构消失，部分细胞出现坏死（图1D

6、和图1E）。　　2.3TUNEL染色的比较　　S组只有少量凋亡细胞（图2A），与其余4组大鼠相比差异均有统计学意义（P<0.01）。M组凋亡细胞阳性率为（63.06±9.05%，图2B），而经吡格列酮预处理的P组相应区域凋亡细胞阳性率（48.10±7.61%，图2C），两组相比差异也有统计学意义（P<0.01），而GP与D组较M组的细胞凋亡率则无明显改变。5组大鼠脑组织中凋亡细胞率比较见表1。　　3讨论　　既往研究表明，脑缺血再灌注时神经细胞可介导大量炎性细胞的聚集和炎性因子的释放[5]，造成神经元凋亡，从而造成对缺血损伤区域细胞的损伤

7、。本研究也发现模型组中细胞凋亡数量相比假手术组显著升高。有研究发现，PPARγ激动剂能活化细胞外信号调节激酶而抑制NF-κB的激活[6]。NF-κB可调控表达许多参与炎症反应、氧化损伤、免疫反应和细胞凋亡等过程的蛋白基因。持续活化在垂死神经元中的NF-κB可诱导细胞凋亡，包括重新进入细胞循环失败和生成死亡蛋白[7]；炎症反应过程中释放一系列细胞因子信号降解IκB的激酶（IKK）活化并磷酸化IκB的两个Ser残基，释放出与I&kapp