影响ｅｌｉｓａ方法的因素与分析

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1、影响ELISA方法的因素与分析李志斌1吴箫2吴衍芝3(1.青岛市胶州中心医院山东青岛266300)(2.青岛市妇女儿童医院山东青岛266300)【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】1672-3783(2015)06-0205-01【摘要】酶联免疫吸附测定(ELTSA)是20世纪70年代发展起来的一种检测技术，其特异性强，灵敏度高，操作简单，在医学检验有广泛的应用，为辅助临床诊断起到了积极的作用［1］。但影响ELISA测定的因素较多，操作过程中每个环节都会对实验结果产生影响。现对影响实验结果的常见因素进行探讨分析：【关键词

2、】酶联免疫作用影响1标木的保存与釆取ELISA检测大部分以血清为主。常规方法采集，避免溶血，溶血标木会增加非特异性显色。标木如有细菌污染，会产生假阳性反应，标木保存时间过长，使间接法的试剂木底加深。不完全抗凝的标木因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性。2试剂的准备试剂在ELISA过程中决定着实验的成败。洗剂是来分离游离的和结合的酶标记物的，清除残留在板孔没能与固定相抗原或抗体结合物质及非特异性吸附的干扰物质洗剂下来。应严格按要求洗剂，洗板时各种试剂盒的洗液不要混用，洗液结晶应待其溶解后配制。板浸泡时间为40s左右,孔内液体吸收干净，防止洗液

3、在孔内形成气泡。3检测过程中各环节应注意事项加样时，样木应加在板孔的底部，不要加在孔壁上部或溅出。影响ELISA方法的因素与分析李志斌1吴箫2吴衍芝3(1.青岛市胶州中心医院山东青岛266300)(2.青岛市妇女儿童医院山东青岛266300)【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】1672-3783(2015)06-0205-01【摘要】酶联免疫吸附测定(ELTSA)是20世纪70年代发展起来的一种检测技术，其特异性强，灵敏度高，操作简单，在医学检验有广泛的应用，为辅助临床诊断起到了积极的作用［1］。但影响ELISA测定的因

4、素较多，操作过程中每个环节都会对实验结果产生影响。现对影响实验结果的常见因素进行探讨分析：【关键词】酶联免疫作用影响1标木的保存与釆取ELISA检测大部分以血清为主。常规方法采集，避免溶血，溶血标木会增加非特异性显色。标木如有细菌污染，会产生假阳性反应，标木保存时间过长，使间接法的试剂木底加深。不完全抗凝的标木因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性。2试剂的准备试剂在ELISA过程中决定着实验的成败。洗剂是来分离游离的和结合的酶标记物的，清除残留在板孔没能与固定相抗原或抗体结合物质及非特异性吸附的干扰物质洗剂下来。应严格按要求洗剂，洗板时各种

5、试剂盒的洗液不要混用，洗液结晶应待其溶解后配制。板浸泡时间为40s左右,孔内液体吸收干净，防止洗液在孔内形成气泡。3检测过程中各环节应注意事项加样时，样木应加在板孔的底部，不要加在孔壁上部或溅出。3.1样品少加或多加，都会引起本底增高。结缔组织病等病症吋也会引起本底升高或假阳性［2］。另外，当溶血吋，血红蛋白具有过氧化物酶的性质，可催化A，B液显色而造成假阳性［3］。2.2酶结合物的不正确加入。加在较高的孔壁上或孔口，也会引起本底升高或假阳性。2.3保温ELISA方法作反应吋，两次抗原抗体反应一般在37°C经1-2h,产物的生

6、成可达顶峰。避免蒸发，板上应加盖或用塑料贴封纸盖板孔，板不宜叠放。温育的温度和吋间应力求准确。采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应，边上的值会偏高，应注意。3.4显色和比色四基联苯胺［TMB］,经辣根过氧化酶［HRP］作用后，约4Omin显色达高峰，终止后要在3分钟之内读数，否则强阳性会变低，酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作吋室温在15—3O°C。仪器先预热15—3Omin后，测度结果更稳定。3.5温育试剂盒升高反应的温度，会加快反应，增加吋间会延长反位，也会引起阴性高值或假阳性。培养箱高于370C，同样会

7、引起高值阴性。3.6洗板试剂盒中提供的洗液应该稀释到规定的倍数使用，过多稀释洗液，会影响洗液的效果，而是反应的本底过高。稀释洗液的水砬该是新鲜的蒸馏水。水中如果含有过多的钙离子，镁离子，这些离子会占用表面活性剂，影响洗剂效果。3讨论虽然ELISA操作步骤简单，但格环节都不可忽视。温育吋间及温度、显色反应吋间长短、试剂标本加入量、操作速度、洗板液的配置等各个方面都要严格操作规程，重视每一步操作细节，这样才能作出可靠的结果。参考文献[1]王玉兰.临床免疫学和免疫学检验[M].3版。北京：人民卫生出版社，2003：91-92.[2]陈慰峰.

8、医学免疫学[M].4版。北京：人民卫生出版社，2004：244-245.[3]伍伟健，郭如华.ELISA试剂灰区设置方法的探讨[J].中国生物制品学杂志，2008，21(10)：911-912.[4]徐新礬，龚国富，马萍