elisa试验的影响因素分析

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1、ELISA试验的影响因素分析谢强，肖传宇，陶峰，谢守风，邱淑俊，李雪莲，[摘要]ELISA试验是将待测抗原或抗体先固定于固相载体表而，再用酶标记的抗原或抗体与已被固定的相应抗体或抗原发生特异性反应，加入酶底物及色原后显色，，显色程度与待测抗原或抗体量呈相关性L该试验因其特异性、敏感性、操作简便己广泛应用于实验室常规检测屮，但由于该试验手工操作步骤较多，很多因素都会影响检测结果。现将平时工作屮一些常见的影响因素分析如下：[关键词]标本；试剂；加样；温浴;洗涤[abstract]ELISAtestisfortheantigenorantibodyfixedonthesur

2、faceofthesolidphasecarrierfirst，andthenandenzymelabeledantigenorantibodyhasbeenfixedtothecorrespondingantibodyorantigenspecificityreaction,addingenzymesubstratesandaftertheoriginalcolorofcolor，andthedegreeofcolorandquantityofantigenorantibodyundertestis1.Thetrialbecauseofitsspecificity，

3、sensitivity,simpleoperationhasbeenwidelyusedinlabroutinetests，butasaresultofthetestmanualoperationstepismore，manyfactorswillaffectthetestresults.Willnowworkatordinarytimessomeofthecommoninfluencefactorsintheanalysisareasfollows:[keywords]sample;reagent;Addthesample;warmbath;wash一、标本的因素血

4、清和血浆均可以用于检测，但血清的分离应在抽血后等血液完全凝固后再离心，以防止因纤维蛋白对洗板机的影响。而肝素抗凝血浆可立即离心测定，但有文献报道肝素抗凝血假阳性率明显高于未抗凝血。故我们认为还是用血清测定较好。同时，溶血是巾丁•红细胞破裂引起的，血细胞成分血红蛋白具有过氧化物酶特性，释放到血浆或血清屮，会催化底物而造成假阳性，对检验结果的影响很复杂2。乳糜血清屮乳糜颗粒增多，会引起血清粘稠度加大，使分子运动速度减慢，减少了抗原、抗体结合的几率3,但实验证明，乳糜血清对ELISA试验的检验结果无明显影响。二、试剂的因素选择试剂时应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好，批间差

5、小、操作方便的试剂。不同厂家的试剂不能浞用，包括底物和洗涤液。检测前应将试剂放置室温平衡半小时，洗涤液应现用现配，同时观察浓缩洗涤液屮有无结晶，若有结晶应放37°C水浴屮融化后方可使用。加入底物TMB时应注意有无颜色变化，若己显色则可能过期或变质，也不可使用。三、技术人员操作的因素加样U的准确与否，直接影响抗原抗体结合物的浓度，直至最后显色的深浅。吸咀插入血清不可太深，若插入太深，吸咀外壁可能粘连太多血清，轻微的抖动动即可将吸咀外壁的血清溅入某它包被孔屮，造成交义污染。加样时应尽可能的垂直加样，并加在包被孔的底部，不可加在孔的上部。实际工作屮我们会发现，用滴瓶加酶和底

6、物时，速度过快，有时会加两滴或加在两孔之间，所以操作时速度应适屮，不可为了追求速度而不顾质:W:。标本量大时，可考虑使用排枪加试剂，可提高速度，但使用排枪时应注意吸咀一定要装好,不可松动，否则会影响加样量的准确度。四、加样时间间隔对结果的影响在竞争抑制法试验中，理论上应该是标本与酶标抗体混合后同吋加入反应孔，若标本先于酶标抗体加入反应孔，则标本会先与包被抗体进行反应，造成特异性假阳性。若是有干扰物质存在吋表现明显，在公平条件下，干扰物质与包被抗体的结合能力会低于标本，而在非公平条件下，干扰物质会优先与包被抗体进行结合，出现假阳性4。本人在工作屮也发现，作HBcAb项目

7、时，若标木与酶加样时间间隔太长，会引起吸光度的趋势性变化。会造成吸光度的降低。特别是针对临界伉标本，fli现假阳性。五、温浴的因素使用水浴箱作为温浴设备时，应注意水的深浅对结果的影响，当水浴箱屮水的的实测温度37°C时，则水而温度可能只有34°C,空气温度更低，甚至只有二十多度，所以当水浴箱屮水位过低时则酶标板微孔没有浸入水屮，则反应温度会达不到37°C,相应的就会影响酶促反应。为防止边缘效应，酶标板应尽量浸入水屮，以保证受热的均匀。水浴时，酶标板应封好，以免水滴滴入包被孔中，或阳性标本的蒸发。严格掌握温浴时间，不可为了早点出结果擠自缩短温浴时间。有