反相高效液相色谱法测定连翘中乌索酸和齐墩果酸的含量

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1、反相高效液相色谱法测定连翘中乌索酸和齐墩果酸的含量作者：邹盛勤，余济海，高兴华，陈武【关键词】连翘；,,乌索酸；,,齐墩果酸；,,高效液相色谱　　摘要：目的建立同时测定连翘中乌索酸和齐墩果酸含量的测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定其含量。色谱柱为NovaPakC18(3.9mm×300mm，4μm)，流动相为甲醇水(88∶12)，流速0.8ml/min，检测波长210nm，柱温25℃。结果乌索酸和齐墩果酸分别在0.912~4.560μg（r=0.9998）和0.312~1.560μg（r=0.9996）范围内峰面积与进样量呈良好的

2、线性关系；乌索酸和齐墩果酸的平均回收率分别为98.2%(RSD=1.1%)和97.8%(RSD=1.4%)。结论此法简单、方便、快速、准确，可为中药连翘质量评价和控制提供科学依据。　　关键词：连翘；乌索酸；齐墩果酸；高效液相色谱　　HPLCDeterminationoftheContentsofUrsolicAcidandOleanolicAcidinForsthiasuspense(Thunb.)Vahl　　Abstract：ObjectiveTodevelopamethodforthequantitativeanalysisofursoli

3、cacidandoleanolicacidinForsythiasuspensesimultaneously.MethodsHPLCn(3.9mm×300mm,4μm)at25℃usingMeOHH2O(88∶12)asmobilephase.ResultsThereplecontentinjectedattherangesof0.912~4.560μg（r=0.9998）and0.312~1.560μg（r=0.9996）forursolicacidandoleanolicacidrespectively.Theaveragerecovery

4、rateofursolicacidandoleanolicacidple,convenient,quickandaccuratemethod,andcanalsobeusedscientificallyinthequalityestimationandcontrolofChinesetraditionalmedicineForsythiaSuspense.　　Keyatairesinoside）和多种烃类、醛酮类、醇酯醚类挥发性成分［1~3］。现代药理研究表明，连翘具有广谱抗菌、抗病毒等作用，对丹毒、颈淋巴结结核、尿路感染、扁桃体炎、肾炎双球菌

5、等均有抑制作用［4~6］，常用于急性胃炎，呼吸道感染等病症。本实验采用乙醇超声提取，建立HPLC法同时测定了连翘中乌索酸和齐墩果酸的含量，该法简单快速，灵敏准确，重现性好，为控制连翘的内在质量提供了科学依据。　　1仪器、材料与试剂　　1.1仪器m×300mm，4μm)，7725I进样阀，Empom×300mm，4μm)；流动相为甲醇水（88∶12，V/V）；流速为0.8ml/min；检测波长为210nm；柱温为25°C，进样量15μl。乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于9000，对照品混合溶液及连翘样品溶液的HPLC色谱图见图1。　　2.2溶液的

6、制备　　2.2.1混合对照品溶液的配制精密称取干燥至恒重的乌索酸和齐墩果酸对照品22.8mg和7.8mg，混合至10ml容量瓶中，溶解定容。精密量取1ml置于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为乌索酸、齐墩果酸对照品混合溶液。　　图1对照品和连翘样品的HPLC色谱图（略）　　2.2.2样品溶液的制备取连翘样品于80℃恒温干燥10h，粉碎，精密称取约4g，加入95%乙醇溶液40ml，超声提取120min，冷却至室温，滤过，滤渣用乙醇超声洗涤2次，合并过滤液于50ml容量瓶，乙醇定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，得样品溶液。　　2.

7、3线性关系实验精密吸取对照品混合溶液4，8，12，16，20μl，按2.1色谱条件进样并测定峰面积。以峰面积对进样量进行线性回归，乌索酸和齐墩果酸的回归方程分别为：YUA=5.78×105X+1.35×103，r=0.9998，YOLA=6.32×105X-5.90×103，r=0.9996。表明乌索酸进样量在0.912~4.560μg，齐墩果酸进样量在0.312~1.560μg时，线性关系良好。　　2.4色谱进样精密度实验精密吸取乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液15μl进样，重复5次，测得乌索酸峰面积相对标准偏差（RSD）为0.6%（n=5），

8、齐墩果酸的峰面积相对标准偏差为0.9%（n=5），表明仪器精密度良好。　　2.5方法重现性实验精密称取连翘样品5份，按2.2.2项制备样品溶液，在2.