冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株cne2细胞的放射增

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1、冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE2细胞的放射增【关键词】冬凌草甲素鼻咽肿瘤放射增敏A［ABSTRACT］Objective:ToobservetheradiosensitizationofOridoninanditsmechanismonnasopharyngealcarcinomacelllineE2.Methods：Theradiationsensitizationenhancementratio（SER）inedbyclonogenicassay.Cellcycledistributionetry.Results：TheSERentgroupayberelateatoc

2、hangesofthecellcycle.［KEYI1640（美国GibcoBRL公司），补充10%胎牛血清（杭州四季青公司）、100?IU/ml青霉素和0.1?mg/ml链霉素。置于37?℃、5%CO2培养箱在全湿条件下培养。1.3照射条件使用6MVX线直线加速器照射，照射距离为100?cm，照射野为10?cm×10?cm大，室温下单次照射。1.4克隆形成实验测定药物放射增敏性分为单纯照射组和药物+照射组，后者在照射前予以冬凌草甲素100?μmol/L，培养箱内培养24?h。照射剂量分别为0、2、4、6、8、10?Gy。胰酶消化，计数细胞数，逐级稀释后将细胞接种在塑料平皿中。在培

3、养箱内开放培养14?d。然后取出培养皿，弃去培养液，PBS清洗2遍，甲醇固定15?min，去除固定液，姬姆萨染色30?min，对含50个细胞以上的克隆进行计数，计算机进行统计学处理，用单击多靶数学模型进行曲线拟合做图，求曲线参数D0、Dq、N值。最后求放射增敏比(sensitizationenhancementratio,SER),公式如下：SER=单纯照射组D0值比药物+照射组D0值。1.5流式细胞分析1.5.1实验分组将增殖良好并处于对数生长期的E2细胞制成细胞悬液，随机分成4组：（1）空白对照组：不加药物及不作照射，单纯培养液培养24?h；（2）药物治疗组：加入含100?μ

4、mol/L冬凌草甲素的培养液中培养24?h；（3）照射治疗组：照射6?Gy，单纯培养液培养24?h；（4）联合治疗组：加入含100?μmol/L冬凌草甲素的培养液培养24?h后更换为单纯培养液；再照射6?Gy，单纯培养液培养24?h。1.5.2PI分析细胞周期收集不同组细胞，70%冷乙醇固定过夜，RnaseA37?℃水浴消化30?min，PI避光染色30?min，上流式细胞仪检测细胞周期分布。1.6统计学处理所有实验重复4次。所得数据经SPSS10.0for期最少。各治疗组细胞周期均发生变化：G1期比例下降，G2/M期比例上升，见表1。其中以联合治疗组最明显，G1期占(35.3±5

5、.1)%，G2/M期占(45.2±6.5)%，与其余各组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。*3讨论鼻咽癌的临床治疗以放疗为主，化疗为辅，但大多数化疗药物的毒副作用较强，故寻找有效的天然抗肿瘤药物协同放射治疗以增强疗效、降低毒副作用，具有广阔的应用前景。冬凌草甲素是从冬凌草中提取出来的有效抗癌成分，其主要化学结构是一种四环二萜类化合物。有研究表明，冬凌草甲素具有广泛的抗肿瘤作用，对多种肿瘤细胞增殖具有显著的抑制作用，包括食管癌、肝癌、结肠癌以及白血病等［35］。本研究中克隆形成实验结果显示，冬凌草甲素联合放射后较单纯放射后D0和Dq值减小。其中D0下降表示E2细胞对放射的敏

6、感性上升；Dq降低反映杀伤E2细胞的阈剂量变小。故加入一定浓度的冬凌草甲素，可使放射剂量减少，从而产生一定的放射增敏作用。本研究中流式细胞分析显示，与单纯药物治疗组和单纯照射治疗组比较，两者联合应用后G2/M期比例增加(P＜0.05)。虽然G2/M期比例越高，越有利于肿瘤细胞DNA损伤的修复，使部分亚致死性细胞和潜在致死性细胞恢复正常以避免凋亡，但是G2/M期较其他期对放射线敏感［6］。总之，冬凌草甲素对E2细胞具有放射增敏性具有一致性，其放射增敏的机制可能与改变细胞周期有关。【］肖大江，朱国臣，王晓岚，等.田基黄、冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞系E细胞毒作用的研究［J］.齐齐哈尔医

7、学院学报，2005，26(12):13961397.［3］冯长伟，潘祥林，邹俊晖，等.冬凌草甲素对人白血病细胞系K562细胞生长的抑制作用［J］.山东中医药大学学报，2000，24（3）：225226.［4］张典瑞，任天池.冬凌草甲素的药学研究进展［J］.中国药学杂志，2003，38（11）：817820.［5］刘明月，范魁生，樊青霞，等.冬凌草甲素诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究［J］.河南肿瘤学杂志，2004，17（3）：167168.［6］胡国清，孙银萍.放