hplc法测定丹参脂溶性成分的含量

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1、HPLC法测定丹参脂溶性成分的含量【关键词】丹参脂溶性成分HPLC质量控制【Abstract】ByusingHPLCtechnology，thispaperestablishedarapidandreliableHPLCmethodforsimultaneousdeterminationofmaintanshinonesofSalviamiltiorrhiza．Fourtanshinonesn(4．6mm×250mm，5μm)．Agredientelutionedbyusingmethanol-obilephase

2、．ThefloL•min-1．TheRSDoftherepeatabilityethodisrapid，easilyoperated，reliableandcouldbeusedforthequalitycontrolofSalviamiltiorrhiza．【Keystation色谱工作站)。1.2试药丹参酮I、丹参酮IIA对照品购自中国生物药品检验所，二氢丹参酮、隐丹参酮对照品购自长沙上河生物科技有限公司。甲醇、乙腈为色谱纯(美国Merck公司)，丹参药材购自安徽亳州中药材市场。1.3试液制备1.3

3、.1对照品贮备液:取对照品二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA适量，精密称定，加入甲醇制成对照品混合液，即得。1.3.2供试品溶液的制备:取丹参5g，加入甲醇50mL，超声处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过即得。1.4色谱分析条件色谱柱:AgilentZorbaxSB-C18色谱柱(4.6×250mm,5μm，Agilent公司)，流动相A为0.1%乙酸溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱：0-5min时65%B，10～30min时70%B，40min时95%B，流速1.0mL/min

4、，柱温35℃，检测波长280nm，进样量20μL。2　实验结果与讨论2.1线性关系考察逐级稀释对照品储备液1-100倍得到8个不同浓度的对照品溶液，按1.4项下的色谱条件进行分析，以峰面积为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，绘制工作曲线，计算各对照品的回归方程，见表1。表1四种丹参脂溶性成分线性回归方程2.3重复性试验按1.3.2项下方法制备同一批供试品溶液5份，计算每克丹参药材中各成分含量。二氢丹参酮含量0.74mg•g-1，RSD1.86%;隐丹参酮含量1.34mg•g-1，RSD1.32

5、%;丹参酮I含量3.23mg•g-1，RSD1.03%;丹参酮IIA含量1.75mg•g-1，RSD0.89%。2.4稳定性试验按1.3.2项下方法制备供试品溶液，按1.4项下色谱条件连续7天内进样测定，每天连续进样3次，测定峰面积，计算二氢丹参酮RSD1.42%，隐丹参酮RSD0.95%，丹参酮I的RSD0.93%，丹参酮IIA的RSD0.77%，表明样品溶液至少在一周内稳定。2.5加样回收试验配制二氢丹参酮0.253mg•mL-1、隐丹参酮0.469mgmL-1、丹参酮I1.

6、012mg•mL-1、丹参酮IIA0.778mgmL-1的对照品溶液10mL。分别精确量取0.8，1.0，1.2mL的对照品溶液各3份于锥形瓶中，挥干，每份加入精密量取丹参药材粉末约2g，混合均匀，精密加入25mL甲醇，按1.3.2项下方法制得供试品。按1.4项下色谱条件进行HPLC分析，每个样品进样3次，计算平均加样回收率。各物质平均加样回收率分布在98.3%-101.6%之间，符合检测要求。2.6样品测定结果取丹参药材，粉碎过筛，按1.3.2项下方法分别制备供试品溶液各5批，按1.4项色谱条件分析，

7、每个样品进样3次，计算1g丹参药材中二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的含量分别为0.71mg•g-1、1.32mg•g-1、3.34mg•g-1、1.70mg•g-1。3　讨论与结论本研究对丹参脂溶性成分的提取方法做了比较分析，分别采用了回流法、渗漉法、冷浸法、超声法、超临界萃取法，结果显示超声法操作简便、提取效率高，因此最终采用该法作为脂溶性成分的提取方法。本研究采用HPLC技术对丹参药材中脂溶性成分进行了鉴定和含量测定分析，研究结果表明，实验所确立的方

8、法准确可靠、操作简单、快速，检测范围全面，有利于提高丹参药材的质量控制标准，维持原药材的质量稳定性和用药安全性，值得进一步推广。参考文献[1]曹芝君,邱德凯,沈敏,陈颖.重组肝再生增强因子、苦参素和丹参对肝脏星形细胞株IG12的作用[J].上海第二医科大学学报，2002,22(6):501-504.[2]邵泉,赵浩亮,苗青旺,等.肝硬变大鼠肝部分切除术后肝再