携带可调控β-内啡肽基因的腺病毒治疗疼痛的研究

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1、上海交通大学医学院缩略词表硕士学位论文缩写英文全称中文全称ITRInvertedTerminalRepeat反向末端重复序列Kankanamycin卡那霉素KbKilobases千碱基对kDaKilodaltons千道尔顿LBLuria-BertaniculturemediumLB培养基LUCFireflyluciferase萤火虫荧光素酶MOIMultiplicityofInfection感染复数NEPpp-NGF-beta-endorphinfusiongene神经生长因子前导肽-β-内啡肽融合基因PCRpolymerasechainreaction多聚酶链式反应PFUPla

2、queFormingUnit空斑形成单位RFPRedfluorescentprotein红色荧光蛋白RT-PCRRetrotranscriptPCR逆转录聚合酶链反应RU486Mifepristone抗孕酮片—米非司酮TCID50TissueCultureInfectiousDose5050%组织培养感染剂量WtAdWidetypeAdenovirus野生型腺病毒2上海交通大学医学院原创性声明硕士学位论文上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发

3、表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日I上海交通大学医学院使用授权书硕士学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）

4、学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日II上海交通大学医学院前言硕士学位论文携带可调控β-内啡肽基因的腺病毒治疗疼痛的研究前言慢性疼痛是指急性组织损伤修复后疼痛持续超过1个月、疼痛持续或反复发作超过3个月以上或与组织损伤有关的疼痛预计持续存在或加重，神经性疼痛、炎症性疼痛以及癌性疼痛均会引发慢性疼痛[1]。据报道，在发达国家大约有近30%的人口每天都经历着慢性疼痛的折磨[2]。目前慢性疼痛的治疗方法有很多，主要是给予麻醉性镇痛剂和非甾体类抗炎药等，但这些方法都只能达到短期疗效，并且往往会带来药物耐药、依赖或成瘾等严重的副作用[3]。因此，寻找一种安全有效、作用持

5、久、经济方便、副作用小的镇痛方法已成为目前疼痛治疗研究的热点。随着细胞分子生物学的发展和基因工程技术的日臻完善，基因治疗作为一项新的生物干预手段已被应用于慢性疼痛的治疗研究中。目前疼痛基因治疗的研究最常使用的是通过上调止痛基因表达来对疼痛进行干预的直接体内疗法。它是利用基因重组技术将各种止痛基因插入载体基因组加上启动子，再导入神经细胞，从而促进止痛基因的表达。常用的止痛基因有内啡肽[4-8]、神经生长因子家族基因[9]、阿片受体[10]、白介素2[11]和白介素10[12]等。1995年，Beutle等[4]首次将带有小鼠神经生长因子前导肽与β-内啡肽编码序列的融合基因（NEP）

6、重组逆转录病毒转染NIH3T3细胞，发现培养液中可检测到高浓度的β-内啡肽，从而解决了β-内啡肽作为治疗基因的可能。之后，Finegold等[5]采用含NEP的复制缺陷型腺病毒给炎性痛大鼠进行椎管内注射，证实这种病毒可以有效抑制鹿角菜胶的炎性痛觉过敏反应。我们的前期研究[6]也证实，椎管内单次注射携带NEP融合基因的第一代复制缺陷型腺病毒能够有效减轻神经病理性疼痛，其时效可达一个月左右。但是上述病毒目的基因的表达呈持续性，目前尚无法控制它们的表达，而且这种表达不是生理性分泌，所以它有可能会干扰机体的内分泌系统调节，甚至持续表达所带来的蓄积还可能会有毒性作用[13]，因此如果在这些

7、病毒内装上一“基因开关”，那就能保1上海交通大学医学院前言硕士学位论文证他们的安全使用。基因开关是指将转基因表达量恰当调控，让其按需产生一定数量和浓度的镇痛物质，以满足机体的需求。目前基因开关的种类已经有很多，如RU486调控系统[14-18]、四环素调控系统[19,20]、甾体激素[21]、β-D-异丙基硫代半乳糖苷和FK1012细胞膜调控系统[17]等等。虽然这些调控系统都各有其应用范围和优点，但是其中有些可能会激活其它的内源基因，如FK1012细胞膜调控系统是通过激活细胞酪