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1、THANK重组腺病毒肝癌基因治疗的实验研究志2006年6月第12卷—6~]ChinJHepa—tobiliarySurg,Jun2006,Vo1.12,No.6THANK重组腺病毒肝癌基因治疗的实验研究吴东沈锋吴孟超?实验研究?【摘要】目的在构建THANK腺病毒载体的基础上,在裸鼠体内观察THANK基因转移对SMMC-7721细胞作用.方法用THANK重组腺病毒,感染SMMC-7721细胞,获取高表达THANK基因的7721细胞,将不同7721细胞接种裸鼠,观察THANK基因转移后7721细胞的成瘤性变化,包括肿瘤生长的大小,速率,肿
2、瘤重量,裸鼠生存期变化以及成瘤后肿瘤组织及脾脏的微观结构变化.结果THANK在7721细胞中的表达可抑制肿瘤细胞的生长,激发机体的抗肿瘤免疫,抑制初次和再次接种的亲代7721细胞的生长,降低了7721细胞的成瘤性.光镜和电镜观察均可发现THANK的转染使得7721细胞的坏死和凋亡比例有所增高,提示THANK在裸鼠体内可能通过某种机制增强了7721细胞的凋亡比例.结论THANK在裸鼠体内可诱发有效的抗肿瘤免疫.【关键词】癌,肝细胞;THANK;TNF超家族;基因转移;腺病毒Invitrostudyonanti—tumoreffectso
3、fTHANKWUDong,SHENFeng,WUMengchao.EasternHepatobiliarySurgeryHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanai200438,P.R.China[Abstract]ObjectiveTostudytheanti—tumoreffectsofTHANKinnudemice.MethodsTHANKadenoviruswasusedtOinfeetSMMC-7721cells.TheSMMC-7721cellswithhighexpres
4、sionofTHANKwereharvestedandinoculatedintothemice.ThetumorgenicityofTHANK-transducedce11swasdetermined.Meanwhile,thegrowthrateandweightoftumor,survivalrateofthemiceanduItrastructuralchangesofthetumorandspleenwereobserved.ResultsTheexpressionofTHANKintheSMMc_7721cellsnoto
5、nlyinhibitedthegrowthofthetumorcellsbutalsoinducedasystemicimmuneresponseagainstthecellsandre-challengedparental7721cells,thusdecreasingthetumorge—nicityof7721cellsinnudemice.TheTHANKexpressioninthetumorincreasedthenecrosisandap—optosisof7721cells.whichindicatesthatTHAN
6、Kcanupregulatetheapoptosisof7721cells.Conclu—sionsTHANKtransductioninSMMC-7721cellsinduceseffectiveimmuneresponseinnudemice.[Keywords]Carcinoma.hepatocellular;THANK;TNFsuperfamily;Genetransfection;Adenovirus材料和方法1.材料和仪器:日立H一600型透射电镜,4～6周Balb/cnu/nu裸鼠购自中科院上海动物研究所.2.THANK
7、重组腺病毒对SMMC-7721细胞的感染:在成功构建THANK腺病毒的基础上,取对数生长期的7721细胞2×1O,用制备的病毒上清,以MOI为1O感染,培养5～7d,获取高表达THANK基因的7721细胞细胞株,ELISA进行检测.3.肝癌细胞SMMC-7721在裸鼠体内的成瘤性基金项目:国家自然科学基金资助项目(编号:30171051)作者单位:200438上海市,第二军医大学东方肝胆外科医院分析:将对数生长期的7721细胞,转染有载体pAd—CMV的7721细胞以及转染有pAd—CMV_THANK的7721细胞,用EDTA-胰酶混
8、合液消化,经细胞计数,调成细胞悬液,于4～6周裸鼠的左背部皮下接种肿瘤细胞悬液2×10./K.分别为7721组1O只,pAd—CMV一7721组15只,pAd—CMV—THANK一7721组15只.于接种肿瘤细胞后7d,
