肝细胞肝癌组织中p34cdc2表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

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1、肝细胞肝癌组织中p34cdc2表达及其与细胞增殖和凋亡的关系作者：张晓战，南克俊，李春利，陈玲【关键词】,p34cdc2激酶;,,增殖细胞核抗原;,肝细胞癌；细胞周期【Abstract】AIM:Tostudytheexpressionofp34cdc2inhepatocellularcarcinoma(HCC)andtherelationshipbetensofnEighboringnoncanceroustissuesand10healthyhepatocellulartissuesplesmunohistochemicalandTUNELmethods.Alldataandnuclea

2、rofHCCtissues,andnEIghboringnoncanceroustissues,shoallivertissues(P<0.01).PIofHCCandneighboringnoncanceroustissueeterfordetectingHCCcellproliferation.【Keya;cellcycle【摘要】目的:探讨p34cdc2激酶在肝细胞肝癌（HCC）发生发展中的作用及与增殖和凋亡的关系.方法：收集HCC（含癌旁组织42）标本47例，正常肝组织10例，采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2激酶的表达并结合增殖与凋亡特征进行分析.结果：在肝癌组织、癌

3、旁肝组织及正常肝组织细胞中p34cdc2表达定位于胞质中，在癌组织中过表达，差异有统计学意义（P<0.01）.肝癌、癌旁组织中的增殖指数（PI）分别为（30.34±4.46）%与（27.88±5.89）%，肝癌组织明显高于癌旁组织（P<0.05）；肝癌、癌旁组织中的凋亡指数（AI）分别为（8.62±2.28）%与（7.38±2.61）%，肝癌组织明显高于癌旁组织（P<0.05）；p34cdc2蛋白阳性组PI（49.26±4.81）%显著高于阴性表达组(23.07±4.15)%（P<0.05），AI无明显差异（P>0.05）.结论：HCC中增殖与凋亡均高于癌旁组

4、织；p34cdc2和PA一样可作为反映HCC细胞分裂增殖能力的有效指标；p34cdc2并不是HCC凋亡所必须.【关键词】p34cdc2激酶;增殖细胞核抗原;肝细胞癌；细胞周期0引言p34cdc2激酶(简称cdkl)在真核生物细胞周期G2→M期检查点起着正性调节作用.人们发现细胞周期失控是细胞恶变的重要原因.p34cdc2激酶在多种实体瘤中有过表达现象.为检测HCC中p34cdc2激酶的表达情况及其与增殖和凋亡的关系，我们采用免疫组织化学法对47例HCC组织(42例含癌旁组织）及10例正常肝组织进行了研究.1材料和方法1．1材料199901/200401西安交通大学第一医院手术切除47（男3

5、8，女9）例HCC标本，42例含癌旁组织.年龄29~77（平均54.3）岁.所有标本均经病理明确诊断.低分化18例，中分化21例，高分化8例.TNM分期Ⅰ期1例，Ⅱ期12例，Ⅲ期16例，Ⅳ期18例.另10例正常肝组织标本取自健康成年男性意外死亡者.浓缩型mAbp34cdc2SP试剂盒购自美国NeoMarkers公司.PA购自北京中山生物技术公司.原位细胞凋亡检测试剂盒购自德国保灵曼公司.羊血清及DAB试剂盒购自福州迈新公司.1．2方法p34cdc2，PA常规免疫组化SP法.石蜡切片经二甲苯脱腊，梯度乙醇水化，抗原修复(切片置于10mol/L柠檬酸钠缓冲液pH6.0内，热修复5min×3)，

6、1∶50正常羊血清封闭20min，PBS冲洗，加入1∶50稀释的一抗，温盒内37℃孵育2h，PBS冲洗，加二抗，DAB显色，苏木素复染.以PBS代替一抗设立空白对照，以切片内癌旁区作自身对照，p34cdc2或PA阳性片作阳性对照.凋亡：TUNEL法：按操作手册方法进行，其步骤简述如下：切片常规脱蜡、水化；PBS缓冲液冲洗5min×3；同免疫组化微波热修复处理15min；PBS缓冲液冲洗5min×3；加TUNEL液(A液和B液按1∶9混合而成)50μL，37℃下恒温箱内孵育1h；PBS缓冲液冲洗5min×3；每张切片加上抗荧光素抗体(C液)50μL，湿盒内37℃下孵育40min；PBS缓冲液

7、冲洗5min×3；加入新鲜配制的BCIP/NBT显色液，显微镜下观察显色15~30min；自来水冲洗，核快红复染；脱色、透明、中性树胶封片.以PBS代替TUNEL液设空白对照，阳性对照用凋亡阳性片.结果判定p34cdc2：光镜下每张切片在HCC组织中随机选取高倍视野计数500个细胞.先按阳性细胞百分率记分：阳性细胞≤5%为0分，阳性细胞数6%~25%为1分，阳性细胞数26%~50%为2分，阳性细胞数51%~75%为3分，