肝细胞肝癌组织中p34cdc2表达及其与细胞增殖和凋亡的关系论文

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1、肝细胞肝癌组织中p34cdc2表达及其与细胞增殖和凋亡的关系论文张晓战，南克俊，李春利，陈玲【关键词】,p34cdc2激酶;,,增殖细胞核抗原;,肝细胞癌；细胞周期【Abstract】AIM:Tostudytheexpressionofp34cdc2inhepatocellularcarcinoma(HCC)andtherelationshipbetensofneighboringnoncanceroustissuesand10healthyhepatocellulartissuesplesmun

2、ohistochemicalandTUNELmethods.AlldataandnuclearofHCCtissues,andneighboringnoncanceroustissues,shoallivertissues(P0.01).PIofHCCandneighboringnoncanceroustissueeterfordetectingHCCcellproliferation.【Keya;cellcycle【摘要】目的:探讨p34cdc2激酶在肝细胞肝癌（HCC）发生发展中的作用及与增殖

3、和凋亡的关系.方法：收集HCC（含癌旁组织42）标本47例，正常肝组织10例，采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2激酶的表达并结合增殖与凋亡特征进行分析.结果：在肝癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织细胞中p34cdc2表达定位于胞质中，在癌组织中过表达.freelAbp34cdc2SP试剂盒购自美国NeoMarkers公司.PA购自北京中山生物技术公司.原位细胞凋亡检测试剂盒购自德国保灵曼公司.羊血清及DAB试剂盒购自福州迈新公司.1．2方法p34cdc2，PA常规免疫组化SP法.石蜡切片经二甲苯

4、脱腊，梯度乙醇水化，抗原修复(切片置于10mol/L柠檬酸钠缓冲液pH6.0内，热修复5min×3)，1∶50正常羊血清封闭20min，PBS冲洗，加入1∶50稀释的一抗，温盒内37℃孵育2h，PBS冲洗，加二抗，DAB显色，苏木素复染.以PBS代替一抗设立空白对照，以切片内癌旁区作自身对照，p34cdc2或PA阳性片作阳性对照.凋亡：TUNEL法：按操作手册方法进行，其步骤简述如下：切片常规脱蜡、水化；PBS缓冲液冲洗5min×3；同免疫组化微波热修复处理15min；PBS缓冲液冲洗5min×3

5、；加TUNEL液(A液和B液按1∶9混合而成)50μL，37℃下恒温箱内孵育1h；PBS缓冲液冲洗5min×3；每张切片加上抗荧光素抗体(C液)50μL，湿盒内37℃下孵育40min；PBS缓冲液冲洗5min×3；加入新鲜配制的BCIP/NBT显色液，显微镜下观察显色15~30min；自来水冲洗，核快红复染；脱色、透明、中性树胶封片.以PBS代替TUNEL液设空白对照，阳性对照用凋亡阳性片.结果判定p34cdc2：光镜下每张切片在HCC组织中随机选取高倍视野计数500个细胞.先按阳性细胞百分率记分

6、：阳性细胞≤5%为0分，阳性细胞数6%~25%为1分，阳性细胞数26%~50%为2分，阳性细胞数51%~75%为3分，阳性细胞数75%为4分.其次，按染色强度计分，无染色0分，弱染色1分，强染色2分.最后将两项合并，得0分为阴性（－），1~2分为弱阳性（+），3~4分为阳性（），5~6分为强阳性（）.PA阳性染色为细胞核出现棕黄色或棕褐色颗粒；凋亡阳性细胞为细胞核内出现蓝紫色颗粒.根据光镜下观察的显色反应，采用双盲法，随机选择5个高倍镜视野，计数总细胞数及染色阳性细胞数.染色指数10%的切片为阳性

7、切片.增殖指数(proliferatingindex，PI=PA染色阳性细胞数/总细胞数×100%)及凋亡指数(apoptoticindex,AI=TUNEL染色阳性细胞数/肿瘤细胞数×100%).统计学处理：使用SPSS.10统计软件.表1资料应用Kruskal期转移中，p34cdc2激活起动核膜溶解，核纤层磷酸化和解聚，并促进染色质浓缩［9］.通过未成熟p34cdc2的激活，起动夭折的有丝分裂是某种凋亡的机制.喜树碱（CPT）引起HL60细胞DNA损伤，而诱导细胞凋亡，细胞发生凋亡时其p34c

8、dc2的活性明显增高且其表达的量并无变化，细胞周期分析表明细胞处于S期内发生凋亡时，调控周期的其它激酶的活性并无增高，认为HL60细胞在p34cdc2不适当时候被激活引起凋亡发生［10］.本研究中，p34cdc2蛋白阳性组AI与阴性表达组无统计学差异.可能p34cdc2并不是所有凋亡所必须，可能只是在某些种类细胞凋亡中起用.与Martin等［9］研究相同.【