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1、益气化淤中药对大鼠胃癌前病变蛋白激酶C蛋白表达的影响【摘要】 目的观察益气化淤中药对大鼠胃癌前病变胃黏膜蛋白激酶C（PKC）表达的影响。方法采用MNNG、乙醇、饥饱失常等多因素造模。造模型成功后，将造模存活大鼠随机分为自然恢复组，中药高、中、低剂量组,各组大鼠作相应的处理后,免疫组化法检测各组大鼠胃黏膜组织PKC表达水平。结果各治疗组PKC表达较自然恢复组下调,有显著性差异(P<0.05)。结论益气化瘀中药可能是下调PKC的表达，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，而发挥对大鼠胃癌前病变的治疗作用。【关键词】胃癌前病变蛋白激酶C益气化淤
2、中药 Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofYiqiHuayuRecipeontheexpressionofprotEinkinaseC(PKC)inratsodelofGPLainlythroughN-methyl-N-nitroN-nitrosoguanidine(MNNG)togetherulationandunduehungerandovereating.Thesurvivedratsaftermodelinglydividedintospontaneousrecovery,andhigh
3、-,moderate-andloent,theexpressionofPKCmunohistochemicalmethod.ResultsTheexpressionofPKCineachtreatmentgroupentofratsl。 1.2造模及给药方法 选用SPF级6周龄SD♂大鼠62只，体质量100～120g。造模参照严茂祥等［2～6］综合造模方法并加以改进。大鼠自购进后适应性喂养1d。从62只大鼠中随机抽取13只作为正常组,其余49只用于造模。正常组大鼠不做任何处理；造模大鼠每日自由饮用100mg/LMNNG液(饮料瓶用油
4、漆涂黑避光)、进食含0.3g/L雷尼替丁的纯鼠饲料、上午用56℃150g/L的氯化钠液按10ml/kg灌胃，进食2d，禁食1d，进食当天下午用8.5g/L脱氧胆酸钠溶液按10ml/kg灌胃。禁食当天下午用400ml/L乙醇按10ml/kg灌胃，连续24周。24周末时随机抽取正常组和造模大鼠各1只，杀检，观察组织病理学变化(以HE染色光学显微镜下观察的结果为主)，确认模型是否成功。 造模型成功后，将造模存活的48只大鼠随机分为自然恢复组12只。中药高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组)各12只。高剂量组每日每只按20g/kg(相当于成
5、人1d用量的两倍)灌胃，中剂量组按10g/kg(相当于成人1d用量)灌胃，低剂量组按5g/kg(相当于成人1d用量的50%)灌胃。上述治疗16周。自然恢复组同正常组大鼠常规饮食。40周末所有动物禁食1d，处死，剖腹取胃，沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗，肉眼观察，平铺于硬纸板上，于胃窦部剪取组织1块，40g/L多聚甲醛固定，石蜡包埋,切片5μm,免疫组织化学染色。 1.3PKC蛋白表达PKC一抗稀释倍数(1∶100)，染色步骤如下:切片脱蜡入水。3%H2O2室温孵育1min,以灭活内源性酶。最后蒸馏水洗3次。将切片浸入TAB(0.05mol
6、/L，pH7.4)中,电炉加热至100℃,持续30min。冷却后进行下一步。滴加抗原修复液,室温孵育10min，蒸馏水洗3次。滴加正常5%山羊血清封闭液,室温孵育10min，甩去多余液体。滴加稀释的一抗,4℃湿盒内过夜。TAB洗涤3次,每次5min,滴加二抗室温孵育30min。TAB洗涤3次，5min/次，滴加三抗(HIGH-SABC)室温孵育30min。TAB洗涤3次，5min/次，DAB显色。自来水冲洗，苏木复染，封片。 1.4观察方法及判断标准根据 2结果PKC在正常组中主要存在于胞浆,其他组别中,除了胞浆外，在胞膜和胞核也可
7、见。自然恢复组较对照组PKC表达增强,有非常显著性差异(P<0.01)；各治疗组较对照组PKC表达增强,但没有显著性差异(P>0.05)；各治疗组较自然恢复组PKC表达下调,有显著性差异(P<0.05)；各治疗组之间比较没有显著性差异(P>0.05)。结果见表1。表1各组大鼠的PKC蛋白表达(略) 3讨论 蛋白激酶C(PKC)是1977年由日本学者Nishizuka等［8］首次在鼠脑的胞质成分中发现的一种依赖磷脂和钙的蛋白激酶,其广泛分布于真核细胞中,由多种具有不同生物学特性的同工酶组成,是细胞内信号传导的重
8、要递质。PKC通常处于失活状态,被激活后可由细胞质转位到细胞膜,能够使众多蛋白质中的丝氨酸和苏氨酸发生磷酸化而发挥作用。PKC的活化不仅与正常细胞和异常细胞的生长、分化、凋亡等多种生物学效应有关，更在肿瘤的
