青羊参多糖硫酸酯体外抗单纯疱疹病毒ⅱ型活性研究论文

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1、青羊参多糖硫酸酯体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型活性研究论文姜海鸥，黄雪霜，王斌，张峻【摘要】目的体外测定青羊参多糖硫酸酯抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的活性。方法采用MTT法检测化合物对疱疹病毒感染Vero细胞的保护作用。结果青羊参多糖硫酸酯体外抗HSV-Ⅱ的EC50为69.9μg/ml，治疗指数为103。结论在体外，青羊参多糖硫酸酯有较显著的抗HSV-Ⅱ的作用。【关键词】青羊参多糖硫酸酯；单纯疱疹病毒Ⅱ型；抗病毒活性Abstract:ObjectiveToinvestigatetheAnti-HSV-Ⅱactivityo

2、fsulfatedpolysaccharidefromCynanchumotophyllumSchneidinvitro.MethodsVerocellsCynanchumotophyllumSchneidCynanchumotophyllumSchneidland103,respectively.ConclusionSulfatedpolysaccharidefromCynanchumotophyllumSchneidhasobviousHSV-Ⅱinhibitoryeffiectinvitro.Ke

3、yCynanchumotophyllumSchneid；HSV-Ⅱ;Antiviralactivity单纯疱疹病毒（HSV）是一种常见的传染性病原体，HSV-Ⅱ可引起外阴疱疹，是宫颈癌的协同诱因。阿昔洛韦（ACV）治疗人类HSV感染易产生耐药毒株［1］。因此.freelethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazoliumbromide)和十二烷基磺酸钠（Sodiumdodecylsulfate，SDS）均购自Sigma公司，N，N'-二甲基甲酰胺（N，N'－Dimethy

4、lformamine，DMF）购自上海试剂一厂。1.2溶液完全培养基为RPMI-1640（Invitrogen公司），含有10%的小牛血清（Hyclone公司），2mmol/L谷氨酰胺，10mmol/LHEPES，50mmol/L2-ME，100u/ml的青、链霉素。磷酸盐缓冲液（PBS，0.01M，pH＝7.4）。1.3细胞和病毒Vero为非洲绿猴肾细胞，HSV-Ⅱ均由英国MRC惠赠。1.4病毒滴度测定将病毒悬液作连续10倍稀释,常规方法感染单层Vero细胞，37℃，5%CO2培养3d，观察细胞病变(

5、CPE)情况,按Reed-Muench方法计算TCID50。1.5以MTT法检测样品对Vero细胞的毒性取对数生长期的细胞，离心（1,000r/min，10min）后将细胞重悬，细胞浓度调至2×106/ml。在96孔细胞培养板上将被检样品2倍倍比稀释，共设6个梯度，每个梯度设3个重复孔，另设阳性对照组及细胞对照组。分别加细胞悬液后，置37℃，5%CO2培养箱中孵育。于第4天用酶标仪（Bio-Rad3550ELISAreader）测定各孔的OD值（测定波长595nm，参考波长655nm）。按下列公式计算被

6、检样品对细胞生长的抑制率，并计算IC50（50%inhibitionconcentration）值。细胞生长抑制率（%）＝（1－实验孔OD值/对照孔OD值）×100%1.6MTT法检测化合物对疱疹病毒感染Vero细胞的保护作用在96孔平底培养板上，将待测化合物用RPMI1640培养基进行2倍系列稀释。共6个稀释度，每孔100ml,设两个重复孔。同时设置不含化合物的未感染病毒的细胞对照组和感染病毒的病毒对照组；离心Vero细胞（1000r/min，10min），用完全培养基重悬细胞，每孔加入75μl4×1

7、04细胞；感染HSV的每个稀释度中的两孔加入25μl病毒，对照组加入25ml培养基。每孔终体积200μl；置37℃，5%CO2培养箱中培养，第3天补加100μl新鲜培基；第6天将96孔细胞培养板低速离心后（1000r/min,10min），吸弃250ml养上清，再加20mlMTT溶液（5mg/ml），37℃,5%CO2培养箱中孵育4h左右，加入20%SDS-50%DMF(pH4.7),孵育过夜；第7天用酶标仪（Bio-Rad3550ELISAreader）测定各孔的OD值（测定波长595nm，参考波长6

8、55nm），根据下面公式计算出化合物对HSV-Ⅱ感染细胞的保护率,并用插入法计算EC50（50%Effectiveconcentration）值和治疗指数TI(Therapeuticindex)值：细胞保护率（%）＝实验孔OD值－对照孔（HSV+）OD值（对照孔（HSV－）OD值－对照孔（HSV+）OD值）×100%并进一步计算出治疗指数(therapeuticindex，TI)(TI=IC50/EC50)2结果2.1病毒滴度本室保存的HS