广西苦丁茶提取物体外抗单纯疱疹病毒1型活性的实验研究论文

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1、广西苦丁茶提取物体外抗单纯疱疹病毒1型活性的实验研究论文郝静，张美英，王一飞，王亚峰，王小燕，裴赢，任哲，刘秋英.freell，药物对细胞的保护及对病毒感染细胞的综合作用中均表现出明显的活性。结论苦丁茶水提物具有显著的抗HSV-1活性，且初步推测其抗病毒活性是作用在病毒和受体结合，侵入Vero细胞阶段。【关键词】苦丁茶细胞病变效应法空斑减数实验Abstract：ObjectiveToinvestigatetheactivitiesofanti-HSV-1ofcrudeextractsfromIlexKudmchaC.J.Tseng.

2、MethodsCPEobservationandplaquereductionassaychaC.J.Tsengoncelllevelinthreeaspects:cellprotection,HSV1proliferationandsynthesiseffectonHSV1infectedcells.ResultsThestudyresultsinvitroshoIlexKudmchaC.J.TsengcouldinhibitHSV-1anditsIC50l.Crudeextracthadantivirusactivities

3、inthedrugprotectiveactionandthedrugsynthesisactiononvirus,hoIlexKudmchaC.J.Tsenghasanti-HSV-1activity,andtheactivityhappensinthestageofHSV-1bindingandadsorptingchaC.J.Tseng;CPE;Plaquereductionassay苦丁茶IlexKudmchaC.J.Tseng是我国南部及西南部民间传统的药用植物，是冬青科冬青属苦丁茶种常绿乔木，在我国民间应用历史悠久。明代

4、医学家李时珍在《本草纲目》中记载其“苦、平、无毒，南人取作茗，煮饮，止渴明目，消炎利便、通肠”。现代医学研究表明苦丁茶能双向调节机体代谢，增强人体免疫功能，明显降低高脂血症患者的血清总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白，具有清咽利喉、清热解毒、护肝解酒、消炎利便等功效；还对高血压病、高血脂、动脉硬化、糖尿病、肥胖症、结肠炎、便秘、痔疮和各类口腔炎症等有明显的防治作用；用其煮水外洗可杀菌、消炎，防治红眼病、粉刺、暗疮、痱子等多种疾患。常年饮用可以保健身体、延年益寿，被誉为“长寿茶”、“美容茶”，是一种纯天然多功能保健珍品［1～4］。但是对

5、其抗病毒功效的研究相对较少，本实验就由不同溶剂提取物得到的苦丁茶粗提物，以Vero细胞作为体外筛选细胞模型检测其对单纯疱疹病毒1型（Herpessimplex1virus，HSV-1）的抑制作用，为筛选新型抗病毒药物的研发提供思路和理论依据。1材料无环鸟苷(ACV)购于湖北科益药业股份有限公司；单纯疱疹病毒1型（HSV-1）F株购自武汉大学病毒研究所；Vero细胞购于美国ATCC公司，由本室保存。Vero细胞用含10%胎生牛血清的DMEM培养基连续传代3次保持对数生长期供实验用。实验样品由昆明植物所通过以下提取流程获得：收集广西苦丁

6、茶样品（100g）→粉碎→醋酸乙酯提取→甲醇提取→热水提取→得到醋酸乙酯提取物（F1）和水提物（F3）。2方法2.1病毒滴度测定将毒株作10倍系列稀释，常规方法感染单层Vero细胞，37℃，5％CO2培养3d，CPE法观察细胞病变情况，按ReedMuench［5］方法计算TCID50。2.2细胞毒性测定Vero细胞经胰酶消化后，以1.5×105个/孔的密度加入96孔培养板中，待细胞长成单层后弃生长液，用维持液分别将将F1，F3稀释成7个系列浓度，每孔加入100μl，每个稀释度设4个复孔,同时设正常细胞对照组，置5％CO2培养箱中37

7、℃培养，每天观察细胞的变化，计算药物的最大无毒浓度TC0。2.3药物抗病毒的药效学实验Vero细胞在24孔板上培养至单层，弃液，PBS洗涤一遍，分别将不同浓度的F1，F3和病毒稀释液（20万倍稀释）各100μl混合后加入细胞中，每个浓度设3个复孔，设病毒对照组和正常细胞对照组（下同），5％CO2培养箱孵育1.5h，弃上清液，加入由2倍的DMEM维持液和1%羧甲基纤维素以1∶1的比例配成的完全覆盖液1ml，观察72h后，10%甲醛固定10min，1%结晶紫染色30min，清水漂洗、晾干，参照Nitta［6］的方法空斑计数，计算空斑抑制

8、率。空斑抑制率（%）=(病毒对照组空斑数－药物处理组空斑数)/（病毒对照组空斑数）×100%，以药物浓度的对数值为横坐标，以空斑抑制率为纵坐标，根据空斑抑制率结果做出病毒对药物的敏感性曲线，由此得出药物的半数抑制浓度(50%inhib