益智方对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的影响

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1、益智方对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的影响作者：高丽萍，伊朝晖，柴锡庆，程书玲，李贞【摘要】　　目的探讨益智方对阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆能力的影响。方法在基础饲料中添加三氯化铝，Al3+剂量为111.9mg/kg体重，连续染毒3个月复制大鼠AD模型。采用Y-电迷宫仪检测正常对照组、模型组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组大鼠学习记忆能力，观察脑区病理形态学改变。结果益智方能明显增加大鼠逃避正确率、缩短逃避潜伏期，明显减轻大鼠脑神经元损伤。结论益智方是防治AD模型大鼠学习记忆能力减退的有效药物。【关键词】铝阿尔茨海默病大鼠学习记忆益智方老年性痴呆是一种多病因参与

2、的神经退行性疾病,伴随着老年人口的增加，老年性痴呆的发病率也在增加，其中以阿尔茨海默病（AlzhEimerAD)较为多见。本病病因复杂，目前尚缺乏有效的防治药物与手段。根据中医肾藏精、通脑、主智理论，本研究采用氯化铝制作大鼠AD模型，探讨了自拟益智方对大鼠学习记忆能力的影响。　　1材料与仪器AlCl3·6H2O，分析纯，天津双船化学试剂厂产品；水合氯醛分析纯，天津市华东试剂厂产品；多聚甲醛，化学纯，中国医药集团上海试剂化学公司产品。中药复方组份：淫羊藿、熟地、黄芪等组成，由河北省石家庄医药公司提供，生药经河北医科大学药学院生药教研室鉴定均为纯品。按传统方法将中药浸浴1h，

3、文火煎两次，去渣，合并、浓缩，每毫升生药含量为2.7g，4℃冰箱保存，用前巴氏消毒。MG-2型Y-电迷宫仪，张家港市生物医学仪器厂生产；OA切片机Lukar-2135;全自动纤维摄像系统Neg/kg体重，饲喂添加AlCl3·6H2O饲料当天起，3个中药组用中药煎剂灌胃，用量为：低剂量中药组10.8g·kg-1·d-1、中剂量中药组21.6g·kg-1·d-1，高剂量中药组30.4g/kg/天，模型组、对照组大鼠每日灌服等量温开水。动物自由饮水，动物房温度（20±2）℃，第90天，采用Y-电迷宫仪训练和测定大鼠学习记忆能力。　　2.2学习记忆能力测试参照郭宗君方法［1］，在

4、夜晚安静和避光的条件下，用Ｙ型电迷宫仪训练和测试大鼠的学习记忆能力。大鼠首先在Ｙ型电迷宫仪的安全臂灯源处停留适应1min，然后给予电刺激（电压90V，持续1s），当大鼠逃避到新的安全臂灯源处时，让大鼠在该处休息适应1min,顺时针依次将通电臂换为安全臂，连续训练和测定4d，每天10次/只，记录每只大鼠逃避正确率，受电刺激后，大鼠从通电臂灯源处直接逃至安全臂灯源处为正确逃避，所用时间为逃避潜伏期，如果电刺激后，大鼠不出现逃避或逃避到安全臂的非灯源处停留，且对敲击声没有做出正确反应的为逃避错误，其潜伏期记为10s,逃避正确率越高，逃避潜伏期越短，说明学习记忆能力越好。　　2.

5、3脑区病理形态学检查行为实验测试结束后，从每组随机抓取4只大鼠，采用4%水合氯醛按1ml/100g体重腹腔注射，麻醉后固定大鼠，从大鼠胸骨剑突处开胸，经左心室插管至主动脉，快速灌注0.01mol/L的冷生理盐水100ml冲洗血液，之后用4%多聚甲醛500ml灌注，取脑组织后立刻固定于4%多聚甲醛中，常规石蜡切片，HE染色，观察脑组织形态改变。　　2.4数据处理实验结果采用SPSS10.0统计软件对数据进行统计分析。　　3结果　　3.1大鼠一般状况模型组大鼠精神萎靡，常聚堆静卧，被毛蓬松，反应迟钝。各中药组大鼠上述症状明显减轻，且随剂量增加效果愈加明显。　　3.2益智方对大

6、鼠Y-迷宫逃避正确率的影响由表1可见，在连续前3天的测试中，模型组、各中药组大鼠逃避正确率与对照组无显著性差异（P＞0.05），至第4天，模型组大鼠的逃避正确率没有再升高，而明显低于正常对照组（P＜0.05﹚，中剂量与高剂量中药组大鼠逃避正确率明显高于模型组（P＜0.05或P＜0.01），各中药组之间大鼠逃避正确率无显著性差异（P＞0.05）。表1各组大鼠Y-迷宫逃避正确率比较（略）与正常对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05##P<0.01　　3.3益智方对大鼠逃避潜伏期影响连续训练3d后，第4天测定各组大鼠逃避潜伏期。由图1可见，与

7、正常对照组比较，模型组大鼠逃避潜伏期明显延长（P＜0.05﹚；与模型组比较，中剂量组与高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短（P＜0.05或P＜0.01），各模型组大鼠之间逃避潜伏期无显著性差异。　　3.4大鼠脑组织学形态学观察在光镜下观察，对照组大鼠皮层、海马细胞排列规则。模型组大鼠皮层锥体神经元数目明显减少，排列紊乱，层数减少，胞核染色体加深；海马CA1区神经细胞排列紊乱，层数减少，神经元数目减少，锥体细胞颗粒空泡变性，胶质细胞增多，深染，并可见许多固缩细胞，CA3区发现许多细胞内有神经纤维缠结（NFT）样改变。低剂量中药组大鼠脑