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1、腰腿理痛散对自体髓核移植硬膜外大鼠神经相关行为的影响论文.freelepiduralemodel；hyperalgesia；nerveroot腰腿理痛散是根据全国知名中医骨伤科专家郭宪章治疗腰椎间盘突出症(PLID)经验方经剂型改良而制成的纯中药制剂,经长期临床实践结果表明,对PLID有着较好的疗效。为了揭示该药的作用机制,本研究将大鼠的自体髓核组织移植到腰椎硬膜外腔,.freelg/kg)腹腔内注射麻醉,于尾根部距肛门约1cm处切断鼠尾并缝合伤口。在切断鼠尾前,用橡皮条结扎切口的近端以减少出血。无菌条
2、件下,于背部正中切开皮肤(长约2cm)、皮下组织,从左侧棘突上钝性分离椎旁肌,切除L5～6的棘突、左侧椎板和关节突,在手术显微镜下暴露左侧的硬脊膜,确认出左侧的L5、L6神经根,取前切下的鼠尾部的呈胶冻样椎间盘髓核5个(约10mg)轻放于左侧L5、L6神经根背侧周围,注意不造成机械性压迫,由于髓核组织具有很强的粘性,无需特别固定,逐层缝合伤口,假手术组(A组)仅切断鼠尾并缝合伤口。术后3d内,各组大鼠均腹腔注射青霉素钠40万U,每日1次,以预防感染。2.3给药术后第2日开始灌胃,每日1次,连续2周。按人
3、/大鼠体表面积换算等效剂量法计算后,C组用腰痛宁胶囊,灌胃剂量10mL/kg(0.15g/kg)；D、E组灌胃剂量10mL/kg(D组为含原药材0.8g/kg、E组为含原药材0.4g/kg)；A组、B组用生理盐水注射液10mL/kg灌胃。2.4疼痛相关行为观察与检测2.4.1一般行为的观察包括运动功能、有无烦躁、撕咬肢体、频繁的摇动尾巴、后肢或足突然自发抬起、用嘴反复舔后爪、食欲降低、大小便失禁等。2.4.2痛觉过敏观察指标按照文献1方法,各组分别于术前1d及术后4、6、8、10、12、14d随机各取4
4、只,观察其左后肢机械刺激缩爪阈值和热刺激回缩潜伏期的变化。2.4.2.1左后肢机械刺激缩爪阈值测定时大鼠放置于一个纸筒中,后肢露于纸筒外,待其安静后,用特制的痛觉测定器测定痛觉阈值。测定时将注射器针头置于左侧后肢的第4、5跖骨之间,然后再将砝码加于注射器的活塞上,每次加5g,直到大鼠产生缩爪或尖叫反应,记录砝码重量为缩爪阈值。每次测试至少间隔10min,测量3次,取其平均值。以术前1d测得的缩爪阈值为基础痛阈,并用以下公式进行计算：机械刺激缩爪阈值变化＝(缩爪阈值－基础阈值)/基础阈值×100%。结果正
5、值表示痛觉反应迟钝,负值表示痛觉反应过敏。2.4.2.2热刺激回缩潜伏期测定时大鼠放置于一个纸筒中,后肢露于纸筒外,待其安静后,将大鼠的左侧后肢放于一玻璃板上,然后用热辐射仪照射足底,直到大鼠产生收缩反应,记录其从开始照射到产生收缩的时间。每次测试至少间隔10min,测量3次,取其平均值。以术前1d的潜伏期为基础痛阈,并用以下公式进行计算：温度痛阈变化＝(收缩潜伏期－基础痛阈值)/基础痛阈值×100%。结果正值表示痛觉反应迟钝,负值表示痛觉反应过敏。2.5统计学方法运用SPSS10.0软件包进行数据处理
6、。数据用x±s表示,术后和术前比较采用配对比较的t检验,多组间的比较采用方差分析,和对照组的比较采用Dunt-t检验,组间两两比较采用LSD-t检验,P0.05为差异有统计学意义。3结果3.1一般行为在观察期间,大鼠均未出现任何运动功能障碍、也未出现撕咬肢体、频繁的摇动尾巴、后肢或足突然自发抬起、用嘴反复舔后爪、食欲降低、大小便失禁,但B、C、D、E组有部分大鼠逐渐出现易激惹、活动频繁的行为。3.2痛觉过敏观察指标(见表1、表2)表1各组大鼠术后不同时相机械刺激缩爪阈值(略)注：与术前比较,*P0.05
7、,**P0.01；与A组比较,△P0.05；与B组比较,☆P0.05；与C组比较,▽P0.05(下同)表2各组大鼠术后不同时相热刺激回缩潜伏期(略)4讨论PLID引起的腰腿痛是骨科临床常见的症状,但髓核在其中的发病机理及作用尚不十分明了。传统的髓核突出机械压迫并不能满意地解释与髓核相关的所有现象。目前研究发现,髓核具有较强的自身免疫和广泛的生物化学致炎特性。髓核是人体最大的无血运的隐蔽自身抗原,在椎间盘退变、外伤等情况下,暴露的髓核组织中的隐蔽自身抗原与机体免疫系统接触引起自身免疫反应,从而导致神经根的
8、损伤而产生根性神经痛2。此外,在突出的髓核中,磷脂酶A2、前列腺素E2、细胞因子、氢离子、一氧化氮等物质均出现异常改变,其可能在PLID神经功能损伤及疼痛的产生中起着重要的作用,但其具体作用机理仍不完全清楚。皮肤对正常非伤害性刺激产生过度敏感,称为痛觉过敏。痛觉过敏是神经损伤后的一个特征,表现为对非伤害性刺激,如轻触、冷热或者弱的伤害性刺激即引起长时程的疼痛,提示痛觉感受器兴奋性异常升高。机械压迫一般不出现痛觉过敏,而是导致痛觉减退。多数学
