高效液相色谱法测定乌梅中柠檬酸的含量论文

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1、高效液相色谱法测定乌梅中柠檬酸的含量论文.freelm×200mm，5μm），流动相为0.025mol/LNa2HPO4溶液（pH=2.5），流速为0.7ml/min，柱温为25℃，检测波长为214nm，外标法定量。结果柠檬酸线性范围为3.0～9.0μg，r=0.9998.freelinationofcitricacidcontentinfructusmumebyHPLC【Abstract】ObjectiveTodeterminethecontentofcitricacidcontentinFructusMumebyHPLC.Meth

2、odsAHypersilODScolumn(4.6mm×200mm，5μm)ol/LNa2HPO4(pH=2.5)obilphasefordetectionl/minandthecolumntemperatureethod.ResultsThelinearrangeofcitricacidethodissimple，accurate，stableandreproducible，andcanbeappliedtoqualitycontrolofFructusMume.【Keyume;citricacid乌梅（FructusMume）为蔷

3、薇科植物梅Prunusmume（Sieb.）Sibe.EtZucc.的干燥近成熟果实，酸、涩，平，归肝、脾、肺、大肠经，具有敛肺，涩肠，生津，安蛔之功效［1］。用于肺虚久咳，久痢滑肠，虚热消渴，蛔厥呕吐腹痛，胆道蛔虫等症。果实含有机酸（如柠檬酸、苹果酸、琥珀酸等），萜类，甾醇，氨基酸，糖类，挥发性成分，黄酮类，生物碱，微量元素（Fe、Mg、Cu等）［2］。《中国药典》2005年版采用电位滴定法测定乌梅中总有机酸的含量，本文采用HPLC法测定乌梅中柠檬酸的含量，为中药乌梅及含乌梅的中药制剂的含量测定提供依据。1仪器与试剂1.1仪器pom

4、×4.6mm，5μm）；柱温为25℃；流动相为0.025mol/LNa2HPO4溶液（pH=2.5）；流速0.7ml/min；检测波长214nm；进样量20μl。2.2溶液的配制2.2.1柠檬酸对照品溶液的配制精密称取柠檬酸（AR）适量，加水溶解，制成0.5mg/ml的柠檬酸对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备分别取乌梅粗粉约4g，精密称定，置锥形瓶中，精密加水100ml，称定重量，加热回流4h，放冷，补足重量，滤过，收集续滤液。精密量取续滤液1ml于25ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液。2.3标准曲线分别精密量取0.

5、5mg/ml柠檬酸对照品溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml、9ml于10ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得7个不同浓度的对照品溶液。分别进样各20μl，测定峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果，柠檬酸在3～9μg范围内线性关系良好，回归方程为：Y=4376.107+1824436X，r=0.9998。2.4精密度试验精密量取0.5mg/ml柠檬酸对照品溶液6.0ml，加水定容至10ml，连续进样5次（进样量20μl），结果见表1、图1，其峰面积的RSD=0.1%（n=5）。表1精密度试验结果

6、图1柠檬酸对照品HPLC图（略）2.5供试品溶液的测定取乌梅药材约4g，精密称定，按2.2.2法制备，分别测定其柠檬酸含量。结果见表2、图2，RSD=1.36%（n=6）。表2乌梅中柠檬酸含量测定结果图2乌梅HPLC图（略）2.6稳定性试验精密吸取按2.2.2制备的供试品溶液20μl，每隔2h进样2次，测定其峰面积，取其平均值，结果样品峰面积在10h内稳定；RSD%=0.25%（n=6）。2.7回收率试验取已知含量的乌梅药材各2g，精密称定，精密加入50.06mg/ml柠檬酸溶液10.0ml、10.0ml、7.5ml、7.5ml、5.

7、0ml、5.0ml；按供试品溶液测定项测定，结果见表3。柠檬酸平均回收率为99.86%，RSD=2.0（n=6）。表3乌梅中柠檬酸含量测定结果3讨论3.1《中国药典》2005年版采用电位滴定法测定乌梅中总有机酸的含量据报道，有人曾在乌梅中分离出近10种有机酸：苹果酸、柠檬酸、草酸、乙醇酸、乳酸、琥珀酸、焦精谷氨酸、甲酸、乙酸、丙酸。其中最主要的是苹果酸和柠檬酸，且随果实的不断成熟，二者含量会有所变化，早期的苹果酸含量大于柠檬酸，后期则是柠檬酸含量大于苹果酸。此外，乌梅药材中还含有绿原酸、延胡索酸、酒石酸等有机酸［3］。因此，测定乌梅中

8、柠檬酸的含量比测定总有机酸的含量对乌梅质量更具可控性。3.2实验所用柠檬酸为分析纯，含有一分子结晶水一水柠檬酸容易失去结晶水，为确保所柄制的对照品溶液的浓度准确，采用了0.1mol/L氢氧化钠滴定液滴定柠檬酸的含量，再进