雌激素对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2、bax基因表达及细胞凋亡的实验研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。一躲力姥一名妻窖一河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表

2、或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：／欧为砻导师签名：荽户?坛恶>和浑之月>扩日中文摘要雌激素对大鼠急性脊髓损伤后BCL．2、BAX基因表达及细胞凋亡的实验研究摘要目的：研究雌激素对急性脊髓损伤后脊髓组织BCL．2、BAX基因表达及细胞凋亡的影响。方法：140只成年雄性SD大鼠随机分为：空白组14只，损伤组42只，雌激素药物组42只和甲基强的松龙药物组42只，每组包括lh、4h、8h、ld、3d、5d、7d共7个时间点，空白组每点2只SD大鼠，其余组每点各有6只SD大鼠。按改

3、良Allen’S撞击法致伤力为509cf(109x5cm)损伤T9．T10制作动物模型，大鼠用10％水合氯醛麻醉，无菌条件下以T9一T10为中心做后正中切口，咬除T9一T10棘突及椎板，空白组只暴露脊髓，不损伤脊髓，给予相同剂量生理盐水，损伤组术后30分钟经大鼠尾静脉给予等量生理盐水。雌激素药物组术后30分钟经大鼠尾静脉给予苯甲酸雌二醇[100ug／kg]，每天一次，甲基强的松龙药物组术后30分钟经大鼠尾静脉给予静注大剂量甲基强的松龙(30mg／kg)，在各个亚组内至少有6只动物，不足的应及时补充。分别在各时间点处死动物，经

4、心脏灌注取材，标本经梯度脱水，浸蜡，石蜡包埋，制成6微米厚切片，通过对SCI部位标本进行HE染色观察镜下损伤部位脊髓的病理形态，同时对受损脊髓部位进行免疫组织化学检测神经细胞凋亡因子BCL一2和BAX基因的表达及用原位末端标中文摘要记法(Tu妊L法)标记神经元凋亡细胞，观察雌激素、甲基强的松龙对大鼠SCI的神经保护作用。结果：(1)BCL．2在空白组各时间点均未见阳性细胞表达，损伤组和各药物治疗组(Table一3)在SCI伤后4h，损伤部位开始出现较明显的表达，伤后8h数量增加，伤后24h达高峰(BCL．2平均光密度值分别为

5、：损伤组0．273+0．043；雌激素组O．396士0．052；甲强龙组O．395+0．057)，分布范围扩至周围正常组织，伤后3d开始有减少(BCL．2平均光密度值分别为：损伤组0．207+0．050；雌激素组0．308+0．046；甲强龙组0．301-4-0．041)，伤后1周基本上只有微弱的阳性表达。BCL．2阳性细胞胞质着黄色(Fig．10、)，神经元和胶质细胞均有明显表达(Fig．11)。统计分析结果示雌激素组和甲基强的松龙组BCL．2蛋白表达(平均光密度值)比损伤组在相同时间点有明显差异(P

6、和甲基强的松龙组BCL．2蛋白表达在相同时间点无明显变化，无统计学意义(P>O．05)，各组内24h时间点较其它点BCL．2蛋白表达均有明显差异(P

7、AX平均光密度值分别为：损伤组0．191+0．078；雌激素组0．151+0．05l；甲强龙组中文摘要0．1644-0．070．)，伤后7d表达基本趋于伤前水平。BAX阳性细胞胞质着棕黄色(Fig．16)，灰质中神经元细胞，白质中胶质细胞均有大量阳性细胞表达。高倍镜下可见阳性细胞部分呈凋亡形态，阳性信号主要位于胞浆内。图象分析系统分析结果显示雌激素药物组较损伤组BAX蛋自表达明显减少，统计分析结果示雌激素组和甲基强的松龙组BAX蛋白表达比损伤组在同～时间点有明显差异(P

8、同时间点无明显变化，无统计学意义(P>0．05)，各组内24h时间点较其它点BAX蛋白表达均有明显差异(P空白组零星可见TUNEL阳性细胞，损伤组及药物治疗组均可见大量TUNEL阳性细胞，灰质、白质内均可见，脊髓损伤后4h时阳性细胞较为稀疏，8h，1d和