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1、川穹嗪对大鼠心肌肥大JAKSTAT通路作用【摘耍】目的了解川穹嗪对大鼠心肌肥大JAKSTAT通路的影响。方法建立心肌肥大动物模型，40只大鼠随机分为4组，每组10只,分别为血管紧张素II(AngII)组(给予AngII36mg-kg-1-d-1)、AngII加川穹嗪组(给予AngII36mg•kg-1•d-1,川穹嗪50mg•kg-1•d-l)>AngII加PBS组(给予AngII36mg•kg-1•d-1,PBS50mg•kg-1•d-l)>对照组(给予生理盐水36mg•kg-1•d-1),计算心肌肥大指数。培养、鉴定新生大
2、鼠心肌细胞，每天分别给予AngII1X10-7mol/L(AngII2组)、AngII1X10-7mol/L+JI
3、穹嗪1X1O・4mol/L(AngII加川穹嗪2组)，以不加药物作为对照2组，培养7d,应用RTPCR方法检测各组大鼠心肌细胞心房利钠肽(ANP)相对水平，Z)onJAKSTATsignaltransductioninratsyocytehypertrophy.MethodsAcardiomyocytehypertrophy(CH)modeladein40Z50mg•kg-1•d-1;thethird,AngII
4、36mg•kg-1•d-1andPBS50mg•kg-1•d-1;andthecontrol,saline36mg•kg-1•d-1.Myocardialhypertrophyindex(MHI)ol/L;thesecond,AngII1X10-7mol/LandTMZ1X10-4mol/L;andthecontrol,nomedicinegiven.TherelativelevelofofatrialnatriureticpeptideoleculesanalysedbyZgroupdecreased(q=7.53,P<
5、;0.01).ThedifferencesoftheexpressionsofpJAKl,pJAK2andpSTAinAngIIgroup,beforeandafterSMZaided,yocytehypertrophybyinterferingJAKSTATsignaltransduction.［KEYyocytes,cardiac;Hypertrophy;AngiotensinII;Signaltninsduction;Tetramethylpyrazine心肌肥大是血流动力学负荷增加使心脏产生的长期反应，涉及到以心肌细胞
6、体积增大为特征的重塑过程，是启动心力衰竭一个病理过程［1］。近年来研究显示，有许多信号通路在心肌肥大和心力衰竭过程中起重要作用，其中JAKSTAT通路在心脏疾病发病机制中的作用倍受关注［2］。人们对这一通路进行的研究显示，许多细胞因子及非免疫性生物化学递质都能激活JAKSTAT信号通路，从而启动相应的基因转录直接激活心肌肥大(代偿性)和细胞生存相关基因［3］。天然四甲基毗嗪又名川穹嗪，为中药川穹的主要有效成分,具有改善心功能和血流动力学功能作用［4］。川穹嗪治疗心血管病方面研究目前仅限制在细胞水平，本文研究川穹嗪与心肌肥大JA
7、KSTAT通路之间的联系，现将结果报告如下。1材料和方法1.1材料成年EM/F12细胞培养基购自Gibco公司;小牛血清(BS)购自杭州四季青生物制品有限公司;抗体：兔抗人磷酸化JAK/STAT一抗购自美国SantaCruz公司;HRP偶联或荧光二抗购自Amersham公司(Buckinghamshire,UK)。本文所用引物均由上海Sangon公司合成。PCR引物序列为：ANP正义链：5’GGCTCCTTCTCCAT2CACCAA3’，反义链：5’TGTTATCTTCGGTACCG3’，产物大小458bp。总RNA抽提试剂T
8、rizol购自GibcoBRL公司，RTPCR试剂盒购自Promega公司。1.2方法1.2.1建立心肌肥大动物模型将40只成年EM培养液稀释，并加入0.1mol/LBRDU以抑制非心肌细胞的增殖，然后将细胞均匀地接种于25mL培养瓶中，置于37°C,含体积分数0.05CO2培养箱中培养2d,弃原液，用无血清DMEM液洗2次，用含体积分数0.15胎牛血清的DMEM培养2d。分为4组，各10例。①对照2组：加入培养液5mL;②Angll2组：加入AngII0.5ng,培养液5mL,Angll终浓度为1X10-7mol/L;③An
9、gII加川穹嗪2组：分别加入AngII0.5ug,川穹嗪64Ug,培养液5mL,AngII终浓度为1X10-7mol/L,川穹嗪终浓度为1X10-4mol/L。每24h加药1次,每48h换液1次，于加药后第7天收集心肌细胞，提取总RNAo1.2.4RTPCR检测心肌细胞ANP
