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1、大蒜素提取与抑菌试验方案、大蒜素液制备二、提取1材料与方法1.1材料1・1・1菌种。金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)人肠杆菌1.1.2培养基。MH肉汤培养基(购白上海顺勃生物工程技术有限公司)营养肉汤培养基：牛肉膏3g,蛋白月东5g,蒸傑水1L;牛肉膏蛋白J］东培养基：牛肉膏3g,蛋白10g,氯化钠5g,蒸镭水1L。1.2方法1.2.2常规提取法1.2.2.1水煮萃取法。称取大蒜干粉150g放入1L三角瓶中，加入450ml去离子水，在水浴锅中50%恒温90min?每隔15min搅拌一
2、次，抽真空过滤得到滤液；滤渣放回三角瓶中，再加入200m】去离子水，在水浴锅中50*恒温60min,过滤得到滤液，重复一次。把全部得到的滤液合并在一起共得滤液800ml,分装到两个1.0L的萃取分液漏斗中，用石油醯：乙醛：乙酸乙酯(v/v/v)为30：9：1的混合试剂与滤液以1：l(v/v)混合萃取，得到有机相(上相)，重复操作一次。萃取所得有机相用旋转蒸发仪浓缩至50ml左右,转移到100ml小三角瓶中，放入干燥箱中50X干燥至无有机溶剂气味，即得大蒜干粉粗提物。(2)抑菌试验1.2.2•菌悬液的制备。1.
3、金黄色衙萄球菌接种于牛肉膏蛋白丿冻培养基，2.37°C培养24h,3.用接种环挑取形态相似菌落3〜5个，接种于4〜5ml的水解酪蛋白(MH)肉汤中4.37°C孵育2〜6h,5.增菌后的对数生长期菌液用生理盐水配制成吸光值(0D)为0.1的菌悬液6.使用时稀释10倍。2抑菌试验在无菌条件下，将固体培养基加热熔化，当温度降到45°C时，分别注入大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌悬液各10讹。混匀后迅速倒平板若干个，制成若干个分别含有大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的培养基。待培养基凝固后，用无菌的打孔器在每个培养基中打直径为0.
4、7cm孔5或3个皿。标记备用.用无菌移液枪吸取不同浓度的大蒜研磨液各75ML,分别注入五个孔中，32°C恒温箱中培养24h1111。观察记录抑菌大小，重复3次，取其平均值。2不同温度、PH、蒜液浓度处理实验2.1不同温度蒜液抑菌效果比较1、取蒜叶称lOOglO组，2、加100ml水分别于20°C、30°C、40°C、50°C、60°C、70°C、80°C、90°C、100°C蒸煮30mine3、10组取出后分别3500r/min离心10min,4、取上层清液真空抽滤2次，收集滤液，过滤火菌。5、10组大蒜液，
5、每组每个温度分别进行抑菌圈试验。6、作图：同一浓度同一PH下，不同蒜叶处理温度卜的抑菌圈的大小。2.2不同浓度蒜液抑菌效果比较1、取蒜粉称100g5组，2、加100ml水100°C蒸煮30min。3、5组取出后分别3500r/min离心10min,4、取上层清液真空抽滤2次，收集滤液，过滤灭菌。5、5组大蒜液再分别配成100%、80%、60%、40%、20%的溶液,每组每个浓度分别进行抑菌圈试验。6、作图：在同一个温度和PH下，不同蒜叶浓度处理的抑菌圈的大小。2.3不同PH处理后的蒜液抑菌效果比较1、取蒜粉称
6、100g8组，2、加不同PH值缓冲溶液处理，PH分别为2、3、4、5、6、7、8、9等8个PH梯度,3、100°C蒸煮30min。4、8组取出后分别3500r/min离心10min,5、収上层清液真空抽滤2次，收集滤液，过滤灭菌。8组大蒜液每组每个分别PH梯度进行抑菌圈试验。6、作图：在同一个温度下，同一个浓度下，不同PH处理的蒜叶抑菌圈的大小。1.1.3试剂。磷酸氢二钠，磷酸二氢钠(磷酸二氢钾)。1.2.1大蒜溶液与大蒜素的测定収蒜叶称10g,加10ml磷酸盐缓冲液(pH7.8),后3500r/min离心1
7、0min,取上层清液真空抽滤2次，收集滤液，过滤法灭菌，备川。川定硫法测定人蒜索含量。(1)大蒜素提取方案一定硫法1实验部分1、1测定原理大蒜中蒜氨酸的亚枫勲)SO+))和人蒜索的硫代亚佩基()SO+)S)被浓硝酸氧化成硫酸离了，与氯化锁反应形成硫酸钞!沉淀，根据硫酸锲的重最换算出人淼素的含最。1、2试剂硝酸(GR),1()%氢氧化钠(AR),氯化钠(AR),甲基橙(AR)、硝酸银溶液15%氯化顿液，1、3测定方法1.将蒜叶，准确称取5g(精确至0.0001g),2.加浓硝酸3ml〜4ml,用玻璃棒搅拌至黄色
8、，放置20min,3.过滤并洗入100ml容量瓶中,定容至刻度。4.吸取滤液80ml,放入150ml烧杯中5.，加().1%甲基橙指示剂5滴，6.滴加10%氢氧化钠溶液至黄色，用1:1盐酸调节pH=2〜3Z间。7.在电炉上加热微沸，趁热加入10ml15%氯化顿液，搅拌均匀，8.在90。水浴上保温2h,9.川定量(无灰)滤纸过滤,川热去离子水洗至无氯离子(滤液加硝酸银溶液不混浊为止)，1.将沉淀同滤纸
