利福霉素sv高产菌株的选育

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1、摘要利福霉素SV由地中海拟无枝酸菌Amycolatoposismediterranei产生，在生物合成过程中受芳香族氨基酸、利福霉素芳香Iji『体C，N的结构类似物及利福霉素SV的反馈调节。本文根据利福霉素SV生物合成途径和代谢调控理论，对利福霉素SV的产生菌进行了推理选育。原始出发菌种Amycolatoposismediterraneil77经自然选育和原生质体融合分别得到Amycolatoposismediterranei49和Amycolatoposismediterranei174，作为两株不同的诱变出发菌株。选用不同

2、的诱变剂对诱变出发菌株进行诱变处理，分别经过50#g／ml的吖啶黄诱变处理、1％硫酸二乙酯(DES)处理16min、15W的uV照射60s、0．1mol／ml的HN02诱变处理5min、0．8mg／ml的亚硝基胍(NTG)处理40min、UV照射40s和0．1mol／ml的I／N02处理3min复合诱变以及uV照射40s和1％的DES处理10rain复合诱变，再分别采用O．1％的L色氨酸、O．5％L．色氨酸、0．1％邻氨基苯甲酸和O．05％的利福霉素SV进行药物耐受筛选，并结合自然选育进行分离纯化，经过琼脂块初筛以及摇瓶发酵复

3、筛，最终获得利福霉素SV生产菌株Amycolatoposismediterranei7．35，其摇瓶发酵单位达到6518#g／ml，较出发菌株Amycolatoposismediterranei49提高了18．5％。为了充分体现高产菌株Amycolatoposismediterranei7．35的生产优势，激发其产利福霉素SV的潜力，进一步对其发酵培养基进行了调整和优化。选取鱼粉、豆饼粉和KN03三个因素进行单因素以及J下交试验，确定其发酵培养基的最佳组合是鱼粉的添加量为O．5％、豆饼粉的添加量为1．2％和KN03的添加量为O

4、．6％，此条件下利福霉素SV生产菌株Amycolatoposismediterranei7—35摇瓶发酵单位达到6735#g／ml，其发酵产量较发酵培养基调整前提高了3．3％。对利福霉素SV高产菌株Amycolatoposismediterranei7—35连续5次传代，在同一条件下进行摇瓶发酵，分别测摇瓶发酵单位，其利福霉素SV发酵单位稳定在6300#g／ml以上，说明利福霉素SV生产菌株Amycolatoposismediterranei7．35具有良好的传代遗传稳定性。关键词：利福霉素SV：选育；复合诱变；吖啶黄；硫酸二

5、乙酯；亚硝基胍ABSTRACTRifamyeinSVisproducedbyAmycolatoposismediterranei．ThebiosynthesisofrifamycinSVwasinhibitedbythearomaticaminoacids，theanaloguesofaromaticprecursorC7NandrifamycinSV．AccordingtothepathwayandmetabolicregulationofrifamycinSVbiosynthesis，improvementofAmycol

6、atoposismediterraneil77byrationalscreeningwasperformedtoraisetheproductionofrifamycinSV．StrainsAmycolatoposismediterranei49andAmycolatoposismediterranei174wereseparatelyobtainedastwodifferentstrainsformutationfromtheoriginalstrainAmycolatoposismediterranei177，withth

7、emethodsofnaturalselectionandprotoplastfusion．MutantswereobtainedfromthetwostrainsAmycolatoposismediterranei49andAmycolatoposismediterranei174duringinducedmutation，suchas50#g／mlaeriflavinehvdrochoride，1％DESdealing16min，15WUVradiating60s，0．1mol／mlHN02dealing5min,0．8m

8、g／mlNTGdealing40min．compoundmutationofUVradiating40sand0．1mol／mlHN02dealing3min．compoundmutationofUVradiating40sand1％DESdealing10min．Highp