rna干扰maspin基因对胃癌细胞株mkn-28凋亡的影响

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1、重庆医科大学硕士学位论文RNA干扰maspin基因对胃癌细胞株MKN-28凋亡的影响姓名：倪江涛申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：易永芬20090501重庆医科大学硕士研究生学位论文RNA干扰maspin基因对胃癌细胞株MKN-28凋亡的影响摘要目的：构建maspin基因编码区的shRNA真核表达载体，探讨转染重组质粒对胃癌细胞株MKN．28凋亡的影响。方法：1．设计合成针对maspin基因的shRNA与具有荧光蛋白表达的pGenesil一1．1质粒连接，构建的重组质粒分别命名为阳性质粒pGenesil—maspinl、pGenesil-maspin2和阴

2、性质粒pGenesil-HK。2．分别用RT-PCR和Westernblot检测转染重组质粒前后MKN一28细胞maspin、Bcl一2、Bax的表达变化。3．流式细胞术检测转染重组质粒细胞后MKN．28细胞周期变化和细胞凋亡。结果：1．经凝胶电泳、DNA测序分析，成功构建maspin特异性shRNA重组质粒pGenesil-maspinl、pGenesil—maspin2及pGenesil—HK。2．RT-PCR和Westemblot显示阳性质粒pGenesil—maspin转染成功后可明显下调胃癌细胞株MKN．28maspin的表达水平(尸

3、和Westernblot显示阳性质粒转染组Bcl．2表达水平上调(P<0．05)，而Bax表达水平下调(P

4、aspinshRNA基因能下调maspin基因的表达从而抑制胃癌细胞的凋亡，与细胞周期分布的改变有关，作用的分子机制可能与上调Bcl．2和下调Bax的基因表达有关。关键词：maspin，shRNA，凋亡，胃癌重庆医科大学硕士研究生学位论文EFFECTOFRNAINTERFERENCE．MEDIATEDSILENCINGOFMASPINoNAPOPTOSIS0FGASTRICCANCERCELLLINEMKN．28ABSTRACTobjective：Toconstructandidentifyeukaryoticexpressionvectorcontainingmaspin

5、shRNA(shorthairpinRNA)andinvestigatetheeffectonapoptosisofgastriccancercelllineMKN-28aftertransfectedwithrecombinantplasmidMethods：1．ShRNAtargetingmaspingenewasconjugatedintopGenesil-1．1plasmidexpressinggreenfluorescentprotein．RecombinantplasmidswereconstructedincludingpGenesil·-maspinland

6、pGenesil·-maspin2positiveplasmidandpGenesil—HKnegativeplasmid．2．RT-PCRandWesternblotwereusedtodetectmaspin，Bcl一2andBaxexpressionintransfectedandcontrolgroup，respectively．3．Flowcytometrywasusedtoidentifythecellcycleandcellapoptosis．Results：1．Theseplasmidswerevalidatedbygelelectrophoresisand

7、DNA5重庆医科大学硕士研究生学位论文sequenceanalysis．2．RT-PCRandWesternblotanalysisindicatedthatmaspinexpressionWaSdramaticallydown—·regulatedingastriccancercelllineMKN··28aftertransfectedwithpGenesil—maspinpositiveplasmid．3．Bcl一2expressionidentifiedbyRT-PCRandWesternblotwasup