pig7基因在急性白血病表达及对白血病细胞增殖活性影响的研究

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1、中固医学科学院中筒挑和医科大学博i+学位论文英文缩写AMLALL缩略词表英文全称中文名称acutemyeloidleukemia急性髓系白血病acutelymphoblasticleukemia急性淋巴细胞白血病ATRAall-transretinoicacid全反式维甲酸EBFITCGFPethidiumbromide溴化乙啶fluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素greenfluorescenceprotein绿色荧光蛋白LITAFlipopolysaccharideinducedtumornecrosisfactoraf

2、actorMOImultiplicityofinfectionMTT3-(4，5一dimethylthiazol一2一y1)一2，5-diphenyltetrazoliumbromidPBSphosphate—bufferedsalinePIpropidiumiodidepi97p53一inducedgene7RT-PCRreversetranscriptionpolymerasechainreactionSDSsodiumdodecylsulfateSIMPLEsmallintegralmembraneproteininlysosome／latee

3、ndosome脂多糖诱导的肿瘤坏死因子a因子感染复数3一(4，5一二甲基噻哗)一2，5一二苯基四哗溴盐磷酸缓冲盐碘化丙啶p53诱导基因7逆转录聚合酶链反应十二烷基硫酸钠溶酶体／晚期内体膜小固有蛋白VPl6etoposide依托泊甙中周医学科学院中图协和仄科凡学博I’学位论文中文摘要研究目的：检测pi97基因在急性白血病(AL)的表达水平及其临床意义，在基因甲基化调控方面探讨白血病细胞pi97表达异常的可能机制，并通过功能性实验阐释pi97对白血病细胞增殖活性的影响。研究方法：应用实时定量逆转录PCR(RT-PCR)，对138例AL患者、2l例正常人骨

4、髓标本以及9株白血病细胞系进行pi97转录本的检测。限制性内切酶分析以鉴定白血病细胞中存在的pi97转录剪接体。通过甲基化特异性PCR(MSP)明确白血病细胞系pi97基因启动子区域是否存在过度甲基化。观察依托泊甙(yPl6)诱导K562细胞凋亡以及全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化过程中pi97表达水平的变化。构建含有pi97开放读码框(ORF)的腺病毒表达载体pAd5／F35一pi97，并导入白血病细胞使之瞬时表达pi97基因，研究该基因的生物学功能。结果：与正常对照相比，AL进展期(包括初治、复发／难治)pi97mRNA水平明显降低(_

5、P

6、应用AdEasy系统成功构建并包装出AdS／F35一pi97腺病毒及Ad5／F35．GFP对照腺病毒。体外感染白血病细胞系K562、Raji和HL-60后，在细胞高表达pi97蛋白的同时，增殖率并无明显变化，但联合应用化疗药物VPl6作用于K562和Raji细胞后，VPl6IC50值呈降低趋势，MTT比色法和台盼蓝拒染法均检测到细胞增殖受抑(P<0．05)，流式细胞术细胞周期分析显示S期阻滞增强，提示pi97基因产物可增加白血病细胞对VPl6的敏感性。结论：pi97基因在AL存在明显的表达下调并与疗效密切相关。白血病细胞中pi97受累转录本为simp

7、le而非litaf，其沉默机制涉及基因启动子区过度甲基化调节。该基因在白血病细胞分化过程中被诱导表达，并可在化疗药物协同下发挥抑制细胞增殖的抗白血病效应。关键词：白血病，急性：基因，pi97：实时定量聚合酶链反应；甲基化；分化；凋亡；腺病毒载体；增殖；细胞周期中固医学科学院中罔悱和医科人学博l学位论文AbstractObjective：Toinvestigatepi97expressionlevelinacuteleukemia(AL)anditsclinicalsignificance，explorethepossiblemechanismsfor

8、pi97silenceintermsofmethylationcontrol，andclarifytheme