大菱鲆与生长、耐高温性状相关的微卫星标记筛选及微卫星标记的开发研究

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1、上海海洋大学硕士学位论文大菱鲆与生长、耐高温性状相关的微卫星标记筛选及微卫星标记的开发研究摘要大菱鲆(SoophthalmusmaxYmusL．)是我国重要的海水养殖鱼类，具有较高的营养价值和经济价值。近年来，大菱鲆的种质退化现象较为严重。为保证我国大菱鲆养殖业的健康、稳定、可持续发展，目前已开始对其进行遗传改良。本文中系统阐述了国内外鲆鲽鱼类育种的研究进展。根据当前国际上鱼类遗传育种的研究趋势，认为采用选择育种与分子遗传标记技术相结合的方法对其进行遗传改良，可望提高育种成效。因此，本研究以大菱鲆为材料，筛选了与生长、耐高温性状相关的微卫星标记，并进行了大菱鲆微卫星标记的开发研究。

2、主要结果如下：为了揭示出一些影响鱼类生长发育速度方面的遗传信息，本文利用分群分离分析法，以同一批受精卵孵化的同池养殖大菱鲆(ScophthalmusmaximusL．)生长性状发生分离的群体为材料，进行微卫星DNA遗传分析。30个多态性微卫星位点对生长高值组(F组)和生长低值组(S组)各10个样本建立的DNA混合池进行扩增时，在两池间出现了7个差异片段。通过对两组大菱鲆个体PCR扩增出的差异条带进行统计，分析微卫星位点与大菱鲆生长性状的相关性。结果表明，有1个微卫星位点SmaClO在355bp的等位基因片段与大菱鲆生长性状存在一定的负相关性；有4个微卫星位点SmaC02、SmaC0

3、6、SmaC09、B1卜I12／6／3分别在258bp、182bp、226bp、175bp的等位基因片段与大菱鲆生长性状存在正相关性，其中位点Smac09在226bp的等位基因片段与生长性状的正相关性极显著，相关系数达到0．354(P(O．01)。微卫星位点SmaC09所扩增出的等位基因片段可作为具有良好生长特性人工选育群体的分子标记指导大菱鲆的辅助育种。采用微卫星分子标记技术分析大菱鲆耐高温相关特性，为大菱鲆的分子辅助育种提供合适的分子标记。大菱鲆经过耐高温实验处理，将其区分为耐高温组与上海海洋大学硕士学位论文不耐高温组，用于实验分析。采用Salah．M(1997)的方法提取大菱

4、鲆肌肉组织的DNA，进行微卫星引物PCR(SSR—PcR)扩增，所用引物为已知的30个大菱鲆微卫星位点的侧翼保守序列。对PCR扩增出的差异条带进行个体统计，最后进行微卫星位点与耐高温性状的相关性分析。结果表明，有1个微卫星位点Sma-USC25478bp的等位基因片段与大菱鲆耐高温性状存在一定的负相关性；有3个微卫星位点Sma-USC24、Sma-USC27、Sma-USC31分别在106bp、286bp、135bp的等位基因片段与大菱鲆耐高温性状存在正相关性，其中位点Sma-USC27286bp的等位基因片段与耐高温性状的正相关性极显著，相关系数达No．383(尺O．01)，其余

5、3个位点为一般显著性相关。微卫星位点Sma-USC27所扩增出的差异等位基因片段可作为分子标记指导耐热大菱鲆的辅助育种。利用FIASCO的方法构建了大菱鲆以(GT)。为主的微卫星DNA富集文库，检测结果证明该微卫星DNA文库的富集效率在43％左右。测序得N88条含有微卫星DNA的序列的克隆，共得到91个微卫星DNA位点。在这些微卫星DNA位点中，除(cA／GT)。类型的微卫星DNA外，我们还观察到(AG／TC)。、(ACA)m、(ACAG)．。、(GATG)。(ATGG)。等重复序列的微卫星DNA。所得到的微卫星DNA的重复次数在5—95次之间，大部分为10-20次重复，平均重复次

6、数为18．99次。结果显示该方法可以很好的应用于鲆鲽鱼类微卫星DNA位点的分离。这些微卫星DNA标记的获得将为大菱鲆遗传多样性分析和遗传连锁图谱的构建以及分子标记辅助育种奠定基础。关键词大菱鲆，微卫星标记，生长性状，耐高温形状，分群分离分析法，微卫星DNAⅡ上海海洋大学硕士学位论文TheScreeningofMicrosateilitesMolecularMarkerswithReferencetoGrowthTraitandHeat-resistanceofturbot(ScophthalmusmaxittlllSL．)andIsolationofMicrosatelliteDN

7、AinturbotAbstractTurbot(ScophthalmusmaximusL．)isahigh-nutritionandeconomicvaluedspecy，whichisoneofthemostimportantpond-culturedmarinefishspeciyofChina．However,developmentoftheaquaculturehasbeensloweddownduetoseriousgermplasmdegeneration