微藻抗菌活性物质的分离纯化

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1、大连理工大学硕士学位论文摘要抗生素的耐药性限制了传统抗菌药物药效的发挥，从天然产物中寻找、开发新的抗菌药物资源迫在眉睫。海洋微藻由于处于特殊的生长环境，含有丰富的生物活性物质，因此成为新型抗生素药物开发的重要潜在资源，同时微藻营养要求简单、易培养，具有巨大的开发潜力。本研究采用琼脂扩散法测定了22种微藻不同溶剂提取物的抗菌活性，筛选出目标菌株一旋链角毛藻，并对其抗菌活性物质进行了分离纯化研究。主要实验结果如下：22种微藻粗提物显示出不同程度的抗菌活性，旋链角毛藻的提取物抗菌活性最强。旋链角毛藻的脂肪粗提物、多酚粗提物和萜类粗提物对供试菌株均有不同程度的生长抑制作用，开发旋链角毛藻中的抗菌

2、物质具有广泛的前景。各种提取物对细菌的生长抑制作用普遍强于对真菌的生长抑制作用。不同极性溶剂的脂肪粗提物中，石油醚提取物的抗菌谱最广；通过气相色谱法鉴定粗脂肪的脂肪酸含量与组成，发现只有石油醚提取物含有反式亚油酸、产亚麻酸和二十碳二烯酸等8种长链不饱和脂肪酸，因此推测脂肪粗提物中起抗菌作用的主要是这类弱极性多不饱和脂肪酸。石油醚提取物的抗菌活性普遍大于经硅胶柱层析得到4个分离组分的抗菌活性，这可能是由于有些抗菌活性是粗提物中多种脂肪族化合物共同作用的结果，或者是由于在层析、干燥和用各种溶剂处理过程中部分抗菌化合物丧失活性。采用正交实验方法对粗多酚提取条件进行了优化，最佳提取工艺条件为：乙

3、醇体积分数80％，超声次数3次，料液比1：15g／mL，超声时间40min。通过考察8种大孔吸附树脂对多酚提取物的吸附与解吸性能，筛选了一种适合初步分离多酚提取物的大孔吸附树脂AB．8，该树脂的吸附容量可达80．1％。建立了大孔吸附树脂柱层析初步分离多酚的方法，其最佳吸附条件为：料液浓度3mg／mL，上柱流速2mL／min，pH为6；最佳洗脱条件为：70％乙醇水溶液在4mL／min的流速下对AB．8大孔树脂进行洗脱，得到组分CP。利用硅胶柱层析和SephadexLH．20凝胶层析对CP进一步分离纯化，最后得到2个峰组分，分别命名为CPC．1和CPC．2。CPC．2具有较强的抗菌活性，该组

4、分在酚浓度为1mg／mL的条件下，对枯草芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为14．0-J：0．5mm，对大肠杆菌和普通变形杆菌的抑菌圈直径达到16．0-J：0．8ITlln，对真菌的抑制效果也有提高。CPC．2经结构鉴定，确定其为3，4，5．三羟基苯甲酸。关键词：微藻；分离纯化；粗脂肪；多酚；抗菌活性微藻抗菌活性物质的分离纯化IsolationandPurificationofAntimicrobialComponentsfromMicroalgaeAbstractThelimitationofantibioticresistanceontheeffectsoftraditionala

5、ntibioticsprovesthenecessityofexploitingnewantimicrobialcompoundsfromnaturalproducts．Richinbioactivesubstances，marinemicroalgaehavebecomeanimportantpotentialdrugresourceforitsspecialgrowingenvironment．Otherwise，thesemicroalgaearewithexploitationvaluefortheirsimplenutritionalneedsandeasycultured．I

6、Ilthisarticle．weinvestigatedtheantimicrobialactivitiesof22kindsofmicroalgaeusingagardiffusionmethod，andscreenedChaetoceroscurvisetusasthetargetmicroalgae．Themainexperimentalresultswereasfollows：Theextractsfrom22kindsofmicroalgaepresenteddifferentantimicrobialactivitiesagainsttestedmicroorganisms，

7、andChaetoceroscurvisetusshowedthestrongestactivity．Thecrudelipid，polyphenolsandterpenoidsofChaetoceroscurvisetusallinhibitedthemicroorganismgrowthbydifferentdegrees，whichprovingtheprimingexploitationfutureofantibacteri