p55pik对细胞周期的调控和dna合成的影响及机制的研究

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1、华中科技大学硕士学位论文p55PIK对FTC236细胞周期的调控和DNA合成的影响及机制的研究硕士研究生：曹小年导师：胡俊波教授华中科技大学同济医学院附属同济医院胃肠外科中心/肿瘤研究所中文摘要目的:p55PIK的N端24个氨基酸(以下简称N24)能够抑制细胞S期进展，使细胞阻滞在G0/G1期，其可能机制有Rb依赖的途径和Rb非依赖途径的可能性。本研究通过p55PIK腺病毒，高表达p55PIK,检测其对细胞周期及DNA合成的影响，并寻找其Rb非依赖性机制。方法:利用本实验室前期构建的腺病毒Ad-p55PIK-GFP，在FTC236细胞(天然Rb缺失的甲状腺癌细胞

2、)内高表达p55PIK，westernblot方法证明p55PIK高表达后，通过Brdu和H3参入的方法检测p55PIK对FTC236细胞DNA合成的影响，PI方法检测其对细胞周期的影响。通过定量免疫共沉淀方法（quantityco-immunoprecipitationQIP)证明p55PIK对细胞增殖核抗原(proliferatingcellnuclearantigenPCNA)与DNA聚合酶δ(DNApolymeraseδ)之间结合的影响，免疫共沉淀（co-immunoprecipitationIP）证明p55PIK与细胞核增殖抗原之间的结合关系，阐述p5

3、5PIK促进DNA合成的Rb非依赖性机制。结果:通过高表达p55PIK，Brdu和H3检测均发现p55PIK能促进FTC236细胞DNA的合成，PI方法检测发现p55PIK能促进其S期的增多。通过IP证实p55PIK能够与PCNA结合，高表达p55PIK能够促进PCNA和DNA聚合酶δ的结合，而N24能竞争性的抑制p55PIK的这些功能。结论：p55PIK能够直接与PCNA结合，促进PCNA与DNA聚合酶δ的结合，从而促进FTC236细胞DNA合成，调控细胞周期。关键词:磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)，p55PIK，DNA合成，细胞周期。1华中科技大学硕士学位

4、论文Studythefunctionofp55PIKincellcycleregulationandDNAsynthesisandtheRbindependentmechanismCandidate:CaoXiaonianSupervisor:Prof.HuJunboGastrointestinalSurgeryCenter/CancerResearchInstituteofTongjihospital,TongjiMedicalColledge,HuazhongUniversityofScienceandTechnologyAbstractObject:The

5、24-aminoN-terminalofp55PIK(shortforN24subsequentlydescribed)canblockcellcycleatG0/G1phaseanddependentonaRbdependentmechanismandaprobalelyRbindependentmechanism.Inthisstudyweover-expressedp55PIKthroughAd-p55PIK-GFPtoobversetheinfluenceoncellcycleprocessandtheDNAsynthesisandfindtheRbin

6、dependentmechanism.Methods:Over-expressingp55PIKinFTC236celllinethroughAd-p55PIK-GFP(ThyroidcancercelllinethatislackofRbnaturally)andthendetecttheDNAsynthesisbyBrdUandH3ThyrmidineincorporationandthecellcycleprocessbyPIassay.Thenweprovedthatp55PIKcanbindonPCNAbyco-immunoprecipitation(

7、IP),andcanpromotePCNAbindtoDNApolymeraseδbyquantityco-immunoprecipitation(QIP),demonstratingtheRbindependentmechanisminDNAsynthesis.Results:Over-expressionofp55PIKcanpromoteDNAsynthesisandincreasethepercentofSphaseinFTC236cell.P55PIKcanbindonPCNAandover-expressionofitcanpromotePCNAbi

8、ndonDNApolym