mmp2和survivin在非小细胞肺癌组织中的表达与其临床意义

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1、温州医学院硕士学位论文作用：ShinyaIshikawa等【41的研究也认为间质纤维细胞MMP-2在NSCLC的侵袭转移中的作用比肿瘤细胞MMP-2作用更大，但结果还未肯定。survivin(存活素)是凋亡蛋白抑制因子(inhibitorofapoptosisprotein，lAP)家族的新成员，于1997年由耶鲁大学的Altieri等陋1用效应细胞蛋白酶受体一1(EPR一1)cDNA在人类基因组库的杂交筛选中首先发现，是目前所发现的最强烈的凋亡抑制因子。Survivin在大多数恶性肿瘤组织中表达而在正常成熟组织中

2、不表达，有研究发现其与肿瘤的发生发展相关，并且是某些恶性肿瘤预后不良的标志。survivin能抑制细胞凋亡，促进细胞增殖，参与调节细胞的有丝分裂，并且可能是血管形成中生长因子诱导的保护性基因【6J，参与新生血管的形成，为肿瘤的侵袭、转移提供重要的物资基础。近年来发现，MMP-2的表达亦在肿瘤侵袭、转移过程中起重要作用，并也可能参与新生血管的形成【7】。鉴于MMP-2和survivin各自在肿瘤发生发展中起的独特作用，以及它们都可能促进恶性肿瘤侵袭、转移、新生血管形成，且二者是否相互影响尚不明确；MMP一2在肿瘤与间

3、质纤维细胞中的表达，何者对NSCLC的影响更大，尚存争议：以上引起了研究者的兴趣。目前也缺少较大样本的MMP一2和survivin在NSCLC组织中的表达状态与患者预后之间的生存分析。本研究通过检钡fJNSCLC组织中MMP-2(包括肿瘤细胞和间质纤维细胞)和survivin的表达状态，分析与各项临床因素之间的关系，并且运用统计学方法进行生存分析，探讨它们在判断非小细胞肺癌患者预后方面的价值以及两者之间是否存在联系。材料与方法一．研究对象选取2001年1月至2002年12月间在温州医学院附属第一医院胸心外科治疗且资

4、}：{完整的NSCLC病例50份作为本课题研究对象。(1)入选标准：a．原发性非小细胞肺癌病例，行根治性肺叶切除术或全肺切除术：b．术前未经过放疗化疗或其他针对非小细胞肺癌的治疗；c．术后继续进行较完整的后续治疗；d．病史资料完整，组织蜡块保存完好。(2)筛除标准：a．围手术期死亡者，病史资料或随访资料不全者；b．未行肺癌根治性切除术(如剖胸探查、姑息性手术)病例；C．术前曾采用其他治疗(化疗、放疗)者。二．桩床资料的采集温州医学院硕士学位论文查阅患者病史资料，通过电话随访方式对这些患者进行生存情况调查，全部资料录

5、入Excel数据库，共获得50位患者的术后生存资料。术后生存期从手术之日开始计算，以月为单位，观察终止日期为2005年12月。p-TNM分期采用1997年UlccN癌国际分期标准。病理分类依据1998年肺和胸膜肿瘤的新WHO／IASLC组织学分类。三．免疫组织化学染色方法1．主要试剂MMP一2鼠抗人单克隆抗体抗体(迈新公司)suwivin鼠抗人单克隆抗体抗体(迈新公司)免疫组织化学Envision试剂盒(上海长岛公司)O．05％DAB显色剂、二甲苯、梯度酒精、O．01M枸橼酸缓冲液、01MPBS缓冲液、Tris缓冲

6、液、30％H202、蒸馏水、1％BSA(小牛血清)、苏木素、透明剂、中性树脂。2．主要器材切片架、搪瓷缸、塑料切片架、湿盒、微波炉、37。C恒温箱、4。C冰箱、载玻片、盖玻片、Olympus光学显微镜3．免疫组织化学染色步骤(Envision法)根据病理切片核片结果，选取肺癌组织丰富的石蜡块，普通切片机连续切片(厚约6Urn)。(1)石蜡切片常规二甲苯脱蜡(30分钟x2次)后，经过无水酒精3分钟x1次，95％的酒精3分钟x1次，80％的酒精3分钟x1次，70％的酒精3分钟x1次，蒸馏水冲洗5分钟x2次，再至0．1m

7、mol／LPBS缓冲液中清洗4分钟x3次。(2)切片置于蒸馏水新鲜配置的3％H202，室温下20分钟去除内源性过氧化物酶。(3)PBS缓冲液中清洗4分钟x3次。(4)切片置入枸橼酸缓冲液中，高压锅加热抗原修复，持续3分钟后冷水冷却。(5)PBS缓冲液中清洗4分钟x3次。(6)切片滴加1％BSA50pl，置于湿盒中，37。C恒温箱内30分钟。(7)甩去切片上的BSA，滴加一抗50pl，置于湿盒中，37。C恒温箱内30分钟，置40C捌箱内过夜。(8)PBS缓冲液中清洗4分钟X3次。(9)滴加二抗(Envision试剂，

8、工作浓度1：100)，每张切片50pl，370C恒温箱内60分钟。(10)PBS缓冲液中清洗4分钟×3次，Tn缓冲液中冲洗10分钟×1次。(11)滴力IDAB显色液，室温下显色3～5分钟，水洗中止反应。(12)切片置入苏木素复染细胞核30秒。(13)梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶。四．MMP-2的检测与结果判定根据文献资料、试剂说明书中的推荐方法结合预实