ion torrent测序技术检测ⅰ型神经纤维瘤病患者nf1基因突变

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1、万方数据中图分类号UDCR739．461O硕士学位论文学校代码密级10533IonTorrent测序技术检测I型神经纤维瘤病患者Ⅳ川基因突变DetectionofNFlgenemutationsbyIonTorrentsequencingtechnologyinpatientswitheurofibromatosisneurollromatoslst1vveIl作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：朱艳慧临床医学临床检验诊断学湘雅医学院医学检验系王晓春教授论文答辩日期丝!笙』：兰／答辩委员会主席中南大学2014年5月一狙一>

2、免聋彰万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和

3、电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名-．

4、j}_艳蛰万方数据IonTorrent测序技术检测I型神经纤维瘤病患者Ⅳ川基因突变摘要目的：应用IonTorrent个体化基因组测序仪(PGM)检测I型神经纤维瘤病(NFl)患者胛，基因，探讨IonTorrent测序技术检测NFl患者外周血DNA中Ⅳ兀基因突变的可行性，评价相同位点IonTorrent测序与Sanger测序结果的吻合性，了解I型神经纤维瘤

5、患者脬J『基因突变的类型。方法：收集2012年11月至2013年11月送检至广州金域医学检验中心分子遗传室的14例临床确诊的I型神经纤维瘤病(NFl)患者EDTA．Na2抗凝静脉血。提取基因组DNA，首先两管多重PCR扩增患者胛J基因全部外显子，多重PCR产物经纯化后用IonTorrent个体化基因测序仪(PGM)对患者ⅣFJ基因进行测序，检测到致病突变后，设计普通PCR引物并扩增相应外显子，用Sanger测序法对患者ⅣF，基因相应的突变位点进行验证，IonTorrentPGM覆盖不全的外显子需普通PCR扩增并用Sanger测序法重新检测。结

6、果：在14例I型神经纤维瘤病患者中，检测到11例患者ⅣFJ『基因致病突变，各突变均位于不同外显子，无明显突变热点，其中2例无义突变，5例小插入或缺失突变，2例错义突变，2例剪接突变，1例患者突变位于5号外显子覆盖缺失区域，3例患者未检测到致病突变。所有患者NFl基因IonTorrentPGM覆盖率均在97％以上，平均测序深度均在1500～-2100×之间。IonTorrentPGM检测到的致病突变经Sanger测序法验证结果一致。结论：1、IonTorrent测序技术检测ⅣFJ这类多外显子基因快速、万方数据准确，比传统的Sanger测序法操作

7、更简单、结果容易读取，节约了检测时间和成本，有巨大的应用潜力和价值；2、胛J基因突变类型多样，无明显突变热点，大多数突变导致氨基酸密码子提前终止，编码蛋白被截断。11例检测到致病突变的患者中，4例为新发突变。关键词：I型神经纤维瘤病；Ⅳ川基因；高通量测序；IonTorrent分类号：R739．4III万方数据DetectionofNFlgenemutationsbyIonTorrentsequencingtechnologyinpatientswithneurofibromatosisty’peIAbstractObjective：UseIo

8、nTorrentpersonalgenomemachinetodetectNFlgeneofpatientswithneurofibromatosistypeI，ExplorethefeasibilityofNFlgenemutationbyIonTorrentsequencingtechnology,EvaluatethecoherencyofresultsinsamesitebyIonTorrentsequencingandSangersequencing，comprehendthemutationtypeofNFlgeneinpatie

9、ntswithneurofibromatosistypeI．Method：CollectedbloodanticoagulantedbyEDTA．Na2of14pa