植物内生菌来源的天然产物体外抗肿瘤活性研究

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1、摘要紫杉醇、喜树碱衍生物的成功开发表明，创新药物开发的过程实际上是发现先导物和发展先导物的一个反复的过程。由于动植物资源的限制，科研人员开始特别关注从特境微生物(如：海洋微生物、植物内生菌等)次生代谢产物中寻找抗肿瘤活性先导化合物。特境微生物在与宿主长期协同进化的过程中，形成特殊的代谢途径，能够为抗肿瘤新药研究提供丰富的化合物来源。本学位论文对植物内生菌来源的化合物进行体外抗肿瘤活性研究。首先采用M'IT法对植物内生菌来源的化合物进行体外抗肿瘤活性筛选，测试细胞株为人肝癌细胞株SMMC-7721和人宫颈癌细胞株HeLa，顺铂作为阳性对照药。MTT测定结果显示：①化合物Peno

2、ehalasinC(7)、ShJ—LLY—GUXI一2(13)、N-methyl一1H—indole一2一carboxamaide(19)和12'-hydroxyisororidinE(22)对SMMC一7721细胞有明显增殖抑制作用，它们的IC50值分别为35．4、8．5、38．0和6．3I．tg／ml。化合物ChaetoglobosinF(5)、ChaetoglobosinE(6)、Ditryptophenaline(17)对SMMC．7721细胞有较弱的增殖抑制作用，它们的IC50值分别为49．2、51．7和62．3I．tg／ml。(趸)ChaetoglobosinE(

3、6)、PenochalasinC(7)、麦角甾醇(9)、麦角甾醇．5，8．过氧化物(10)、ShJ．LLy．GUXI．2(13)和12’-hydroxyisororidinE(22)对HeLa细胞有明显增殖抑制作用，它们的IC50值分别为12．6、43．9、23．6、26．5、6．0和2．5I_tg／ml。化合物ChaetoglobosinF(5)、N-methyl一1H-indole-2-carboxamaide(19)对HeLa细胞有较弱活性，它们的Ic50值分别为52．7和60．2岭／ml。根据Mrr筛选结果，本学位论文进一步研究化合物19和22对人肝癌细胞株SMMC．

4、7721和HepG-2的增殖抑制作用。用一定浓度梯度(0．01、0．1、1、2和101xg／m1)的化合物19和22分别处理上述两种人肝癌细胞株24h以及用10蚓ml的化合物19和22分别处理上述两种人肝癌细胞株一定时问(6、12、24、48及72h)，结果表明：化合物19和22对SMMC一7721细胞和HepG．2细胞的增殖抑制均呈现出时间依赖性和剂量依赖性，并且发现在该浓度梯度下，化合物19和22的最佳作用时问为24h。本学位论文进一步细胞周期分析发现，化合物19处理后，SMMC．7721细胞和HepG．2细胞均出现微弱s期阻滞；而化合物22处理后，SMMC一7721细胞

5、和HepG．2细胞均出现Gl期阻滞。Westemblot分析发现，经19和22处理后，SMMC一7721细胞和HepG．2细胞的细胞周期负调控蛋白p27的表达均明显增加。这说明，19和22可能通过上调p27蛋白的表达而导致SMMC一7721细胞和HepG-2细胞周期阻滞，进而抑制细胞增殖。本学位论文还采用Westemblot法检测凋亡相关蛋白的表达，以了解化合物19和22是否具有诱导凋亡作用。结果发现，19和22处理SMMC．7721细胞和HepG．2细胞后，细胞中的PARP均可被激活而发生裂解，这说明这两化合物对SMMC．7721细胞和HepG．2细胞均有诱导细胞凋亡的作用

6、。它们诱导肿瘤细胞凋亡的机制有待深入研究。肿瘤的发生发展与细胞增殖和细胞凋亡密切相关，本学位论文在MTr测定结果基础上，从细胞增殖抑制和细胞诱导凋亡出发，研究化合物19和22对SMMC．7721细胞和HepG．2细胞的作用，并初步探讨它们的作用机制，为抗肿瘤新药研制提供重要的实验依据。关键词：天然产物；抗肿瘤活性；细胞增殖抑制；细胞诱导凋亡删AbstractThesuccessfuldevelopmentofderiVatiVesofpaclitaxelandcamptothecinshowedthattheprocessofdevelopinginnovativedrugi

7、saetuallyarepetitiveprocessoffindinganddevelopingleadcompounds．Duetothelimitofresourcesfromanimalandplant，researchersbegantopaymuchattention(eg：marinemicroorganisms，endophyte)tolookforanti-cancerleadcompoundsfromsecondarymetabolitesofmicrobeslivinginthes