单子叶植物内生菌多糖抗肿瘤活性的研究论文

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1、单子叶植物内生菌多糖抗肿瘤活性的研究论文.freell培养基中（500ml三角瓶装），28℃振荡培养48h，然后转种至发酵培养基中（接种量为10%），在28℃振荡摇档上培养96h，生物活性最高，随即放瓶提取。取细菌发酵液（15000g、离心25分钟）洗涤3次，加入3倍体积的95%冷乙醇，4℃过夜;5000g、20min、收集上清、弃细菌，加入KCl（终浓度1%axH2O，nm）:198.8;③SDS-PAGE电泳:以10～15V/cm电压进行电泳，结果显示无明显条带，证明内生菌多糖不含蛋白质。样品用生理盐水和RPMI1640培养液配成20

2、g/L，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，临用前用培养液稀释到所需浓度。1.2.2内生菌多糖体内抗肿瘤实验①取接种7d生长良好的腹水型S-180荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，取腹水，用生理盐水稀释成每毫升含1×107个瘤细胞的悬液，接种于实验小鼠右前肢腋窝皮下，每只小鼠接种0.2ml瘤细胞悬液。将接种S-180肉瘤的小鼠随机分为生理盐水组、实验组和环磷酰胺阳性对照组，标号并称重。接种S-180肉瘤细胞后24h，生理盐水组每只小鼠隔天连续给与实验组给药容积相等的生理盐水1次;实验组每只小鼠隔天按50与100mg/kg剂量给药1次;阳性对照组

3、给予环磷酰胺，每只小鼠隔天按30mg/kg剂量给药1次。各组小鼠于实验的第12天，分别颈椎脱臼处死，完整剥出瘤体，称重，计算抑瘤率。②内生菌多糖抑制小鼠肝癌H22的实验:方法同上。1.2.3内生菌多糖体外抗肿瘤实验分别取接种7d生长良好的腹水型S-180肉瘤小鼠和腹水型H22肝癌的小鼠，颈椎脱臼处死，取腹水，用生理盐水稀释成每毫升含1×106个瘤细胞的悬液，以每孔400μl接入48孔培养板，24h后加药50μl，使多糖浓度分别为25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml，同时设环磷酰胺阳性对照组，使其浓度为30μg/ml，阴性对照组

4、加相应体积的含10%新生牛血清RPMI1640培养液，培养48h后，每孔加MTT40μl，继续孵育4h，弃上清，加入酸化异丙醇40μl，终止反应，转至酶标板上，490nm测定吸光度。1.2.4内生菌多糖对小鼠S180肉瘤生长及存活期的影响荷瘤小鼠模型方法同上。将接种S-180瘤细胞的小鼠随机分为生理盐水组、实验组和阳性对照组，标号并称重。接种S-180瘤细胞后24h，生理盐水组每只小鼠隔天连续腹腔注射与实验组给药容积相等的生理盐水1次;实验组每只小鼠隔天按50、100与200mg/kg剂量给药1次;阳性对照组每只小鼠隔天按30mg/kg剂

5、量给药1次。连续给药5天，第6天分别称重，计算体重增重比，继续饲喂，自接瘤之日起，记录死亡时间。1.2.5内生菌多糖抑制对小鼠S-180腹水瘤细胞分裂指数的影响常规接种S-180腹水瘤细胞24h后，实验组隔天按50mg/kg;阳性对照组每只小鼠隔天按30mg/kg剂量给药1次;生理盐水组每只小鼠隔天连续腹腔注射与实验组给药容积相等的生理盐水1次。连续注射4次，每次注射8h后抽取腹水，用改良苯酚品红染色，显微镜下随机记数1000个细胞中处于中期分裂相的细胞数，计算有丝分裂指数。1.3统计学处理所有数据均以x±s表示，不同实验间差异用t检验，

6、采用SAS软件处理。2结果2.1内生菌多糖对小鼠S-180肉瘤、小鼠肝癌H22的影响由表1和表2可以看出，内生菌多糖浓度为50mg/kg、100mg/kg时，对小鼠S-180肉瘤抑瘤率可达62.84%和65.08%，对小鼠肝癌H22抑瘤率可达66.14%和67.93%，与生理盐水对照组比较有显著的抑瘤效果（P0.01）。表1内生菌多糖对小鼠S-180瘤株生长的影响（略）注:*与NS组比较，P0.01。表2内生菌多糖对小鼠肝癌H22瘤株生长的影响（略）注:*与NS组比较，P0.01。2.2内生菌多糖对小鼠S-180肉瘤、小鼠肝癌H22细胞体

7、外增殖的影响内生菌多糖对S-180肉瘤、小鼠肝癌H22细胞体外增殖的影响结果见表3、表4，内生菌多糖对S-180肉瘤、小鼠肝癌H22细胞体外增殖有一定抑制作用，在25～100μg/ml范围内与浓度呈正相关，与生理盐水对照组比较有显著的抑瘤效果（P0.01）。表3内生菌多糖对小鼠S-180肉瘤细胞体外增殖的影响（略）注:*与NS组比较，*P0.05，**P0.01，***P0.001。表4内生菌多糖对小鼠肝癌H22细胞体外增殖的影响（略）注:*与NS组比较，*P0.05，**P0.01。2.3内生菌多糖对小鼠S-180肉瘤生长及存活期的影响

8、由表5可知按内生菌多糖剂量为25、50、100mg/kg时，小鼠腹水瘤平均体重增重比较对照组分别降低了5.53%、8.56%、10.15%，延长平均存活天数分别为:3.2、5.9、5.4天。表