诺如病毒检测技术新进展

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1、诺如病毒检测技术新进展【中图分类号】R155【文献标识码】A【文章编号】1004-7484(2014)02-0758-02诺如病毒(NorovirusNoV)又称诺瓦克病毒(Norwalk-likeviruses),属杯状病毒科诺女口病毒属，是引起病毒性胃肠炎的重要病原体［1］。NoV是美国学者Kapikian于1972年通过免疫电镜技术首先在发生于美国俄亥俄州诺瓦克镇暴发腹泻疫情患者粪便中发现的病毒颗粒［2］oNoV为单股正链RNA病毒，是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。由于目前不能进行细胞培养和没有动物模型不能进行中和试验，NoV目前无法进行经典的血清分型［3-5］o该组病毒

2、极易变异，此后在其他地区又相继发现并命名了多种类似病毒，统称为诺如病毒。由于NoV遗传的高度变异，在同一时期和同一社区内可能存在遗传特性不同的毒株流行。NoV抗体没有显著的保护作用，尤其是没有长期免疫保护作用，极易造成反复感染［6］。大多数感染者在1〜3天后好转，但小孩、老人和低免疫力低下者可能导致严重脱水［7］。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。1995年，我国报道了首例NoV感染［8］,之后山西、北京、安徽、福州武汉、广州等地区先后发生多起NoV感染性腹泻暴发疫情，在我国5岁以

3、下腹泻儿童中，NoV检出率为19%左右［9］。以前由于检验技术的滞后使得许多NoV感染病例无法确诊。本文综述NoV检测技术的研究进展，为NoV的防控提供理论支持。1电镜法电镜法包括直接电镜法（EM）、免疫电镜法（IEM）和固相免疫电镜法（SPIEM）oEM法观察的灵敏度较低，要求每毫升粪便样品中至少有大约106个病毒粒子，因此只能用于患病早期病毒大量排出时采集的样本检测。IEM法比EM法的敏感性可提高100倍，主要应用患者恢复期血清捕捉同型抗原,从而增加检出率。SPIEM法是将特异性抗体直接包被载网，同时加入蛋白A增加抗体与抗原接触的机会，从而增加检出的灵敏度。方肇寅［9］等曾用20份便

4、样上清液滴膜后，2%PTA（pH6.4）染色直接电镜观察在国内首先发现了诺瓦克样病毒。电镜法的缺陷在于要求观察者有丰富的经验，精密的检测仪器和较大的劳动强度，灵敏度相对较低，检出阳性率只达10-20%,制约了该方法的在NoV检测中的应用［10］,不适于大规模流行病学调查。2免疫法免疫学检测法（EIR）包括放射免疫法（RIA）、生物素-亲和素免疫法(Biotin-AvidinImmun-oassy)、酶联免疫法(ELISA)和免疫层析技术。2.1RIA法和生物素-亲和素免疫法RIA法的灵敏度比IEM法可提高10〜100倍，可以检测出抗体升高的水平，为流行病学提供更有参考价值的资料。RIA法

5、的不足之处在于它需要6d,且需要放射性同位素标记。为了简化方法，美国疾病预防控制中心建立了生物素-亲和素免疫法，其灵敏度与RIA法相当，目前该方法已成为美国疾病预防控制中心检测NoV抗原和抗体的标准实验方法之O2.2ELISA法1992年Jiang等重组杆状病毒表达NoV衣壳蛋白成功后，建立起的NoV酶联免疫检测方法快速、灵敏、经济，其不足之处是免疫反应的株型特异性太强，所以应用范围还比较窄。陈冬梅［12］等用日本赠送的NoV检测试剂盒检测粪便中NoV,分别用NoVGGl、GGII特异性单克隆抗体包被微孔板中的不同小孔捕获粪便标本中的NoV抗原，然后用过氧化物酶标记的抗NoV特异性多克隆

6、抗体检测，所以不同的小孔可同时分别检测GGI、GGII型NoV。共检测167份粪便标本,GGI型阳性20份、GGII型阳性19份,GGI型、GGII型同时阳性7份，总阳性率27.5%(46/167)oMoe等开发一种利用NoV的重组抗原检测唾液中特异性IgA和IgG抗体的ELSIA方法。对该法的评估表明其灵敏度和特异性分别达到100%和95%,但上述结果还有待进一步验证。该方法采样方便，提供了一种检测血清抗体之外的新途径［13］o由于NoV培养还未成功，原来用作试剂的病毒抗原数量受到限制，现在，用分子生物学技术已经可以人工重组NoV的衣壳蛋白，从而解决了上述问题。酶联免疫法特异性强，灵敏

7、度高，诊断迅速，是目前可广泛应用的检测方法。2.3免疫层析技术此技术即免疫胶体金技术，是把层析技术和免疫亲和作用相结合的快速检测NoV的方法，操作简单快速、可靠而应用广泛。该方法是采用抗NoV抗原的单克隆抗体，制成试纸条进行检测。Tak-anashiaS.等［14］首先于检测NoV病毒的检测，并与RT-PCR法进行比较，结果显示，它们的一致性为84.1%、灵敏度为69.8%、特异性为93.7%,病毒载量检测限为106-107拷贝/g