小鼠诺如病毒检测方法的研究

《小鼠诺如病毒检测方法的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文学校代码：10023学号：$2011007001小鼠诺如病毒检测方法的研究所院：北京协和医学院医学实验动物研究所姓名：田胜男指导教师：刘云波教授导师小组：刘云波教授魏强教授宋铭晶教授学科专业：动物学研究方向：实验动物质量控制完成日期：2014年5月中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2Abstract．⋯⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯．：；第一部分前言⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．51．1病原学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．2分子生物学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．3检测方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．4预防和控制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．101．5本论文的研究目的及意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1l1．6前景与展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12

3、第二部分材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯142．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．142．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18第三部分研究结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．273．1RNA抽提方法的优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯273．2一步法RT-PCR反应体系体系的优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．293．3两步法

4、实时荧光定量RT-PCR的建立及优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l3．4IFA方法的建立及优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．333．5ELISA方法的建立及优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯393．6北京地区实验小鼠感染MNV情况的调查结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43笫四部分讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45第五部分小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49附录1：小鼠诺如病毒(MurineNomvirusVirus，MNV)玻片抗原制备作业指导书⋯⋯⋯⋯⋯55附录2：dx鼠诺如病毒(MurineNorovirusVirus，MNV)免疫荧光法检测作业指导书⋯⋯⋯⋯58附录3：dx鼠诺如病毒(MurineNorovirusVirus，MNV)酶联免疫吸附法检测作业指导书⋯⋯6l附录4：dx鼠诺如病毒(MurineNorovirusVirus，MNV)RNA一步法RT-PCR检测作业指导书⋯一64附录5：dx鼠诺如病毒(MurineNorovimsVirus，MNV)cDNAReal—Ti

6、meqPCR检测作业指导书．．67附录6：英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．69致{射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．70中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文中文摘要实验动物的质量与动物实验能否顺利进行关系非常密切，我国要求实验用SPF级小鼠必须排除的病毒有11种，尽管如此仍然会因为动物本身携带的微生物而干扰实验结果。小鼠诺如病毒(MurineNorovirus，MNV)就是从意外死亡的实验小鼠中分离得到，免疫缺陷小鼠感染这种病毒后发

7、生炎症反应甚至死亡。我国关于小鼠诺如病毒的报道还比较少，其致病力及对实验研究的影响尚不完全清楚，也没有明确的感染情况调查【1】。本研究以实现快速、准确、高效的MNV检测为目的，分别建立了MNV检测的PCR方法，实时荧光定量PCR方法，间接免疫荧光试验法和酶联免疫吸附试验法，并对北京市实验小鼠MNV感染情况进行调查，具体工作如下：l、MNV标准化检测技术的建立(1)一步法RT．PCR方法：通过对MNV全基因组序列分析，设计最适的扩增引物并对其优化，对反应体系及反应条件进行优化，使体系的灵敏度最优化，最终确定反应体系为引物浓度0．39moi／L，M92+浓

8、度1．5mmoi／L时，该方法的灵敏度可达到103拷贝；(2)两步法实时荧光定量qPCR方法：