盐霉素抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导凋亡的实验研究

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1、南方医科大学2011级硕士学位论文盐霉素抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导凋亡的实验研究SalinomycininhibitsproliferationandinducesapoptosisofhumannasopharyngealcarcinomacellinVitroandsuppressestumorgrowthinViVo课题来源：自选学位申请人吴丹心导师姓名汪森明专业名称肿瘤学培养类型学术学位型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会委员硕士第二临床医学院陈尊器教授廖旺军教授张为民教授张秀萍教授郑燕芳教授2014年3月30

2、日广州硕士学位论文盐霉素抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导凋亡的实验研究研究硕士研究生：吴丹心导师：汪森明教授摘要研究背景：鼻咽癌为我国最常见的恶性肿瘤之一，源自鼻咽粘膜上皮细胞的恶变，是头颈部肿瘤一个比较明确的亚类。鼻咽癌有着独特的流行病学、临床特点、组织病理学以及病因学，它的发生、发展、临床表现及相应的治疗与其他头颈部肿瘤有一定的区别，好发于东南亚、我国的南方及香港地区，在这些地区每年的发病率高达20／100000。越来越多的证据表明鼻咽癌的与多种因素有关，包括遗传学因素、EB病毒感染、吸烟、饮酒、中草药的使用及环境因素。依据世

3、界卫生组织的病理学分类，鼻咽癌被划分为三类：角化鳞状上皮，非角化型，未分化型。鼻咽癌病理类型以未分化鳞癌为主，主要通过淋巴结转移到颈部淋巴结，也可通过血液转移至肝、肺、骨。尽管作为鼻咽癌的标准治疗放射治疗，在早期鼻咽癌中取得了满意的效果，能极大地提高总生存期及无病生存期，但是对于中晚期患者，放化疗综合治疗却并未取得理想的效果，许多病人出现放化疗的抵抗，并且毒副作用较重，最终产生转移或复发。因此，有必要寻找更加有效有针对性的药物，同时探讨可能的作用机制，更好地治疗鼻咽癌。盐霉素(Salinomycin，Sal)，又名沙利霉素

4、，为一种聚醚类抗生素，常被用作饲养家禽以提高营养摄取率，近年来研究表明相比传统的乳腺癌常规化疗药紫杉醇，盐霉素能有效降低乳腺癌干细胞的比例，在体内，其还能抑制乳腺癌细胞的生长、降低微球形成比例及抑制淋巴结转移。进一步研究表明，盐摘要霉素还能通过多种机制降低某些肿瘤的恶习程度，诱导这些肿瘤细胞产生凋亡，在杀伤肿瘤细胞方面表现出高效性，同时不影响正常细胞的生长。然而目前有关盐霉素对鼻咽癌影响的报道甚少。故本研究拟观察盐霉素在体内外对鼻咽癌细胞的生长抑制作用，并对其作用机制进行初步探讨，从而为盐霉素应用于鼻咽癌治疗提供可能的思路

5、。肿瘤的发生发展离不开各种信号通路的激活或异常改变。研究表明w州B．catellin信号通路在机体细胞的发育、再生及组织的稳态等方面有着重要的作用。越来越多的证据表明W州p—cateIlin信号通路的异常激活与多种肿瘤的产生密切相关，包括头颈部肿瘤、乳腺癌、肝癌、肠癌及肺癌等人类肿瘤。B—catellin蛋白是Wn邯．catellin信号通路中一个关键的中介物。异常的Wnt表达会导致p．catemn在细胞质中积累，并进入细胞核，与T细胞因子(TceUfactor／1ymphoide1111a11cerfactor，TcF／

6、LEF)结合，调节靶基因的表达，TcF／LEF是一类具有双向调节功能的转录因子，若结合B．cateIlin则促进基因转录。LRP6(低密度脂蛋白受体相关蛋白，LDL．receptor-relatedprotein，LRP6)作为W州p．catellin通路中的另外一个受体，属于单次卷曲的跨膜受体，对于wnt信号转导起着重要作用，其磷酸化能导致D．catenjn复合物的破坏、D．catellin蛋白的胞内聚集以及核转位，最终导致Wnt靶向基因的表达，从而引起细胞的凋亡、粘附及周期等方面的改变。尽管wm信号通路参与鼻咽癌的发生

7、发展的具体机制还有待进一步阐明，但是越来越多的证据表明B．ca钯Ilin蛋白异常表达与鼻咽癌的不良预后密切相关。研究目的：本实验以人鼻咽癌细胞株cNE一1(高分化细胞)、cNE．2(低分化细胞)、CNE．2／DDP(低分化耐药细胞)作为研究对象，分析盐霉素对鼻咽癌细胞活力和侵袭能力的影响：在体外，从定性和定量两方面观察和分析盐霉素作用鼻咽癌细胞后是否有凋亡现象的产生及程度分析，从而进一步分析盐霉素介导的鼻咽癌细胞的凋亡途径及凋亡机制；在体内，建立鼻咽癌CNE．2细胞的移植瘤模II硕士学位论文型，观察用药后移植瘤的生长情况及

8、蛋白表达情况，分析Wnt信号通路的变化。从而为盐霉素的进一步研究与临床应用提供实验依据，并奠定理论基础。实验方法：1．CCK一8实验研究盐霉素作用鼻咽癌细胞24h、48h和72h后，三株鼻咽癌细胞Q旺．1、Q正一2、cNE．2／DDP的体外增殖情况，计算存活率，并选取合适的低、高两个药物浓度作为后续研究