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《唐古特大黄issr-pcr反应条件的优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、广西植物Guihaia30(1):112-1162010年1月唐古特大黄ISSR2PCR反应条件的优化1,21,211,213胡延萍,谢小龙,王莉,杨建,李毅(1.中国科学院西北高原生物研究所高原适应与进化重点实验室,西宁810001;2.中国科学院研究生院,北京100049)摘要:利用单因素试验对影响唐古特大黄ISSR2PCR扩增的重要参数进行优化,以期建立其最佳反应条件。结果如下:20μL反应体系包括1.5×PCRbuffer(15mmol/LTris2HCl,75mmol/LKCl),1.00mmol/LMgCl2,0.6
2、UTaqDNA聚合酶,0.125mmol/LdNTP,0.5μmol/L引物和30ng模板DNA;引物UBC888适宜的退火温度为57.4℃。ISSR反应条件的建立为利用分子标记技术研究唐古特大黄居群遗传多样性奠定了良好基础。关键词:唐古特大黄;ISSR2PCR;优化中图分类号:Q943文献标识码:A文章编号:100023142(2010)01201122053EstablishmentandoptimizationofISSR2PCRreactionconditionsforRheumtanguticum1,21,21HUYa
3、n2Ping,XIEXiao2Long,WANGLi,1,213YANGJian,LIYi(1.KeyLaboratoryofAdaptationandEvolutionofPlateauBiota,NorthwestInstituteofPlateauBiology,ChineseAcademyofSciences,Xining810001,China;2.GraduateUniversityofChineseAcademyofSciences,Beijing100049,China)Abstract:Inter2Simple
4、SequenceRepeats(ISSR)isagoodmolecularmarkerforrevealinggeneticdiversity.Reactionsystemdifferedindifferentspecies,sooptimizationofISSR2PCRreactionisveryimportant.Factorswhichaffectthe2+ISSR2PCRamplification,suchastheconcentrationofMg,TaqDNApolymerase,dNTP,primerandtem
5、plateDNAwithdifferentannealingtemperatures,wereoptimizedandselectedbyusingthegenomicDNAofRheumtanguticumasmaterial.OptimalPCR(20μL)mixcontained1.5×PCRbuffer(15mmol/LTris2HCl,75mmol/LKCl),1.00mmol/LMgCl2,0.6UTaqDNApolymerase,0.125mmol/LdNTP,0.5μmol/Lprimerand30ngtempl
6、ateDNA.Thesuitableannealingtemperaturewas57.4℃forprimerUBC888.EstablishmentofthePCRreactionconditionscouldfavorfurtherstudiesonthegeneticdiversityofR.tanguticumbyusingISSRmolecularmarkertechniques.Keywords:Rheumtanguticum;ISSR2PCR;optimizationISSR(Inter2simpleSequenc
7、eRepeats)标记,即个随机碱基,然后以此为3′或5′引物,对两侧具有简单重复序列区间DNA标记,是由加拿大蒙特利反向排列的SSR间的基因组片段进行扩增。与尔大学Zietkiewicz等于1994年创建的一种基于RAPD相同,ISSR具有操作简单,所需DNA量少,PCR的分子标记技术。基本原理是:利用基因组中无需预知研究对象基因组序列等优点,但ISSR标存在的简单重复序列(SimpleSequenceRepeats,记产物多态性远比RFLP、SSR、RAPD丰富,可提SSR)本身设计引物,在SSR的3′或5′端加锚1～4供更
8、多关于基因组的信息,且由于其引物较长、退火3收稿日期:2008204214修回日期:2009203215基金项目:国家科技支撑计划项目(2007BAD64B04)[SupportedbyNationalKeyTechnologyR&DProgram(2007BA
